益生菌、菊粉纳米微胶囊制备及其对肠沙门氏菌的体外抑菌效果研究

来源 :延边大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qkhp3
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抗生素的滥用导致食品安全与公共卫生问题,欧盟等国家已经严禁使用抗生素,我国也即将面临这一问题,微生态添加剂是抗生素的安全有效的替代品。在该项目中制备的微胶囊是合生元(Synbiotics)意义上的微生态制剂,即益生菌(Probiotics)和益生元(Prebiotics)作为芯材一同包被在果胶/壳聚糖为壁材的微胶囊中,研究这种微胶囊对肠沙门氏菌体外抑菌效果的影响。首先,在实验室的条件下制备微胶囊。本试验共分为3组,试验1组为含乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici,PA)的果胶/壳聚糖微胶囊(Pectin/Chitosan microcapsule,PC(PA)MCs);试验2组为含乳酸片球菌和菊粉(Inulin,PA)的果胶/壳聚糖微胶囊(PC(PA-I)MCs);试验3组为含乳酸片球菌和菊粉纳米(Inulin nanoparticles,PA)的果胶/壳聚糖微胶囊(PC(PA-PIN)MCs)。首先确定果胶为壁材的最佳浓度,其次以包埋率、粒径、外观形态和冻干前后微胶囊的活菌数以及FITC标记的菊粉纳米粒子为指标优化反应参数制备双层壁材包被的PA、PA-I和PA-PIN,同时对不同包被物质进行比较,然后采用平板活菌计数技术测定了在模拟胃肠道中,PA、PA-I和PA-PIN微胶囊乳酸片球菌的活菌数、成活率和释放性能、沙门氏菌的抑菌性能、共培养试验中乳酸片球菌的生长情况以及短链脂肪酸(SCFAs)的浓度。结果表明:(1)果胶浓度为5%时,制备的微胶囊呈圆形,不易破,适合制备微胶囊。PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs 和 PC(PA-PIN)MCs 三组粒径分别为 1.9 mm、1.92 mm和2.01 mm,形态均匀。从电镜(SEM)图中可以看出微胶囊表面结构缜密、没有裂缝、孔洞以及破坏现象,表明微胶囊化的效率高,对芯材具有良好的保护作用。PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs和PC(PA-PIN)MCs三组之间包被率和冻干前后载菌量均不显著(P>0.05),但菊粉纳米内化乳酸片球菌后果胶/壳聚糖微胶囊的包被率和冻干后的载菌量与其它两组比较有提高的趋势,表明菊粉纳米内化乳酸片球菌后果胶/壳聚糖微胶囊效果要更好。FITC标记菊粉纳米(FPIN),将PC(PA-FPIN)MCs在pH 7.2肠液中缓释3 h后,观察到菊粉纳米成功内化到乳酸片球菌中。(2)果胶/壳聚糖微胶囊在pH 2.0模拟胃液条件下60min后,未被包被的乳酸片球菌存活率几乎为零。其中PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs的存活率高于未包被的乳酸片球菌,差异显著(P<0.05),而PC(PA-PIN)MCs则显著高于PC(PA)MCs和PC(PA-I)MCs两组(P<0.05)。结果表明,果胶/壳聚糖壁材可以为乳酸片球菌提供更好的保护。果胶/壳聚糖微胶囊经过30min模拟肠液处理后,释放率都达到 60%以上,但 PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs 和 PC(PA-PIN)MCs 三组在胃中的成活率显著高于未包被的乳酸片球菌在肠液中的成活率(P<0.05),说明双层包被的微胶囊在肠液中具有良好的释放能力。(3)PA、PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs 和 PC(PA-PIN)MCs 对沙门氏菌均有抑菌能力。其中PA组抑菌能力最低,PC(PA-PIN)MCs抑菌能力极显著高于PC(PA)MCs、PC(PA-I)MCs组(P<0.5),对沙门氏茵(Salmonella Gallinarilum,SG)的抗菌活性最高。(4)在共培养试验中随着时间的推移发现四组微胶囊乳酸片球菌活菌数没有显著差异,说明菊粉纳米粒子内化到乳酸片球菌中并不影响乳酸片球菌的生长。对SG处理9 h后培养基中乙酸盐,丙酸盐,丁酸盐和总SCFAs的浓度中,PC(PA-I)MCs和PC(PA-PIN)在乙酸盐、丁酸盐和SCFAs中产量显著高于PA、PC(PA)MCs(P<0.5),两组之间差异不显著,但PC(PA-PIN)MCs的丁酸和总SCFAs的产量最高,抑菌效果好。综上所述,菊粉纳米为益生元的乳酸片球菌微胶囊对动物肠道沙门氏菌有显著的抑菌效果,有望成为绿色饲料添加剂,应用到幼龄动物的生产。
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