论文对DPV UL33基因(GenBank登录号为EF643556)开展如下研究:DPV UL33基因序列分子特性分析、克隆、原核表达和抗体制备,基因在鸭胚成纤维细胞内的转录和表达产物细胞定位等。结果如下:1.鸭瘟病毒UL33基因分子特征分析DPV UL33基因大小为408bp,编码135aa。通过信号肽、跨膜区、磷酸化位点和疏水性进行分析预测,发现该基因编码的蛋白不存在跨膜区和信号肽结构,只含有8个潜在的磷酸化位点。并通过进化树分析发现该基因属于α-疱疹病毒属,并且与MDV、ILTV、HVT等禽类疱疹病毒的进化关系最近,与其他疱疹病毒关系则较远。2.UL33基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备通过构建pET-32/UL33重组原核表达载体,利用IPTG进行诱导表达,得到大小为37kDa的重组融合蛋白,与预期表达的蛋白大小相一致,其主要是以包涵体的形式存在。最佳表达优化条件为37℃下加入0.2 mmol/L IPTG诱导6h。兔抗UL33抗体IgG经辛酸-硫酸铵盐析和High-Q阴离子交换层析纯化,该方法具有高效、特异性强的优点。3.DPV体外感染宿主细胞UL33基因蛋白细胞定位及转录时相分析DPV感染宿主细胞后,用间接免疫荧光的方法检测到UL33编码的蛋白位于细胞胞核中。对其蛋白表达时相的动态分析结果为病毒感染2h后即可在细胞中检测到荧光,8h荧光量达到最大,之后逐渐降低。转录时相是通过荧光定量PCR用相对定量的方法检测该基因转录的情况。用SYBR GreenⅠ染料法检测各时间段收取的细胞样品检测到1h开始出现转录,8h达最高峰,32h下降至最低水平。