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本实验以在本实验室培养的蓝隐藻(Chroomonas placoideaT13)的藻蓝蛋白PC645作为材料,探索了藻蓝蛋白的存在状态与镁离子浓度的关系,并对在不同硫酸铵饱和度下所得的各级藻蓝蛋白样品的亚基组成、比例及疏水特性进行了定量研究。 采用蔗糖密度梯度离心方法,分离并观察到了比异二聚体分子量更大的PC645复合物的存在,该复合物在以往的文献中未曾报道。 对纯化后的藻蓝蛋白聚合条件的研究结果表明,在加入的镁离子浓度在0~50mmol/L时,藻蓝蛋白基本集中于0.4mol/L~0.5mol/L蔗糖梯度范围,以异二聚体形态为主;但在100mmol/L以上时,随着镁离子浓度的提高,出现一定比例的解聚的藻蓝蛋白单体形式,证实高浓度镁离子不利于藻蓝蛋白的聚合。 利用变性IEF、SDS-PAGE电泳技术对70%、80%、90%、100%的硫酸铵分级沉淀法所得各级藻蓝蛋白纯化样品(A645/A280>7)的亚基进行定性、定量分析。确定了纯化后的藻蓝蛋白至少含有四种发光亚基,即α1(9kDa,pI≈9.1)、α2(8.3kDa,pI≈7.1)、β1(20.3kDa,pI≈6.0)、β2(16.7kDa,pI≈5.7)。且不同硫酸铵饱和度下所得的PC645沉淀样品中β2亚基的相对含量与硫酸铵饱和度的增加(水溶性增加)呈负相关。说明蓝隐藻中PC645的存在形式不是单一的,并且β2亚基所占比例的不同可能会导致其疏水性差异。 对不同硫酸铵饱和度下所得的PC645沉淀样品进行疏水性分析的实验结果表明,70%沉淀样品可以产生3种疏水性不同的洗脱峰(大峰、肩峰、小峰),说明沉淀物是由不同的疏水性混合组分构成;而80%、90%、100%沉淀样品的洗脱组分中疏水性最弱的大峰组分的相对含量有逐渐增加的趋势,疏水性较强的肩峰和小峰组分的相对含量逐渐减少,甚至消失。分析显示,三种疏水性不同的组分都是异二聚体PC645,且光谱特性没有明显区别。 我们由上述结果推测,PC645在叶绿体中的存在状态可能是不均一的;不同硫酸铵饱和度下得到的疏水程度不同的PC645样品可能是由至少两种以上的异二聚体形式按不同比例混合而成的,分别为(α1α2)(β1β2)和(α1β)(α2β)形式,PC645组分的疏水性差异与其异二聚体形式以及内β1和β2亚基的含量有关。