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本论文采用原核表达系统pGEX-4T-3分别对正常成人外周血单个核细胞(PBMC)的CD3epsiloncDNA(hPCD3ε)和死胎胸腺细胞的CD3epsiIoncDNA(hTCD3ε)进行了克隆和表达，并分别进行了亲和层析纯化和初步鉴定。
分别以从正常成人外周血单个核细胞(PBMC)和七月龄死胎胸腺细胞中提取的总RNA为模板，oligo(d)T12-18为引物，逆转录成第一链cDNA。然后以cDNA作为模板，PCR分别扩增出约600bp的hPCD3ε和hTCD3ε双链cDNA片段，与pCRII克隆载体连接后转化感受态E.coliDH5α。从阳性重组子中提取质粒，经酶切鉴定得到约4kb的克隆载体片段和约600bp的目的基因片段，与预期结果相符。将重组克隆质粒进行测序分析，并将其与GenBank中的人CD3ε(登录号：NM-000733)进行BLAST比对，结果表明，hPCD3ε与hTCD3ε仅一个核苷酸差异(714A/714G)，但AGA与AGG均编码精氨酸(Arg，R)，属于同义突变；hPCD3ε和hTCD3ε与GenBank中的人CD3ε编码的氨基酸序列100％同源，核苷酸序列的同源性分别为100％和99％。然后用BamHI/XhoI分别双酶切重组克隆质粒和表达载体pGEX-4T-3，纯化后连接目的基因片段和表达载体，分别构建pGEX-4T-3-hPCD3ε和pGEX-4T-3-hTCD3ε重组表达质粒，转化相应的感受态表达宿主菌BL21，获得的阳性重组表达质粒经双酶切鉴定和测序分析，获得与重组克隆质粒完全一致的结果。
pGEX-4T-3-hPCD3ε/BL21和pGEX-4T--3-hTCD3ε/BL21分别在25℃和37℃，用1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)进行诱导表达，表达产物经还原型SDS-PAGE电泳鉴定，在约49.5KD处有特异性表达条带，与预期融合蛋白分子量大小相符。对pGEX-4T-3-hPCD3ε/BL21表达条件进行初步优化，在一定的诱导条件范围内，37℃，0.02mmol/LIPTG诱导表达3小时和25℃，0.02mmol/LIPTG诱导表达4.5小时表达量均达最高，分别为34.8％和29_3％；在37℃和25℃诱导表达的融合蛋白均主要以包涵体形式存在，有部分以可溶性形式存在，但在25℃时，诱导的可溶性融合蛋白含量(12.8％)比在37℃(9.4％)更高。将大量表达的可溶性蛋白用GST亲合层析纯化，分别得到纯度为86.1％(GST-hPCD3ε)和88.3％(GST-hTCD3ε)的融合蛋白。免疫印迹和斑点印迹实验证明，这些融合蛋白既与兔抗人CD3ε多克隆抗体反应，也与抗GST多克隆抗体反应；但不与WuT3，WuT4，WuT8，WuTac等单克隆抗体反应。
本论文实验制备的GST-hPCD3ε和GST-hTCD3ε融合蛋白为研制抗人CD3ε单克隆抗体杂交瘤细胞株奠定基础，也为进一步开发完善WuT系列单抗诊断试剂作准备。