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马铃薯Y病毒(Potato virus Y, PVY)是马铃薯Y病毒科、马铃薯Y病毒属的代表种。PVY寄主范围广泛,可侵染茄科等多种作物,给马铃薯和烟草等作物造成严重经济损失。PVY分离物可分为O株系和N株系,O株系在烟草上引起花叶,N株系可以引起烟草叶脉坏死,对烟叶生产危害更大。本实验通过定点突变分析,获得了含有多位点突变的PVY弱毒突变体,并在其调控与马铃薯X病毒(Potato virus X, PVX)协生的位点引入突变,获得了有应用潜力的弱毒突变体。具体结果如下：1、利用PVYN-605全长cDNA侵染性克隆,构建了四个单位点突变体A(D205G)、 B (N339D)、C(K400R)、D (E419D),接种发现,与野生型PVYN-605相比,症状明显减轻。将这些位点聚合到一起得到的多位点突变体ABC、ABD、ABCD在烟草上不引起叶脉坏死症状,突变体浓度分别降低了25%、38%、47%。2、测定多位点弱毒突变体的交叉保护效果。接种多位点突变体ABC、ABD、 ABCD于普通烟后,在保护间隔期15天、20天时进行挑战接种后没有观察到叶脉坏死症状。ELISA检测病毒的积累量明显低于野生型,约为野生型积累量的30%。这些结果表明突变体ABC、ABD、ABCD具有较好的交叉保护效果。3、明确了调控PVY与PVX协生作用的关键氨基酸。将PVYHC-Pro中的FRNK基序突变为FINK, NRT基序突变为ART后,HC-Pro丧失了抑制RNA沉默的活性。与野生型HC-Pro不同,上述两个突变体插入PVX侵染性克隆pgR106后浸润本氏烟,不引起植株的系统坏死。4、在PVYHC-Pro调控和PVX协生的位点引入突变体ABCD,新获得的突变体对野生型PVY有交叉保护效果,但与PVX无协生作用。