基于SSR技术构建黑龙江省粳米DNA指纹数据库的研究

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黑龙江粳米品质优良,商业价值巨大,但市售粳米掺假现象严重。本实验基于SSR分子标记技术,以61份黑龙江省主栽的粳米为材料,筛选出19对核心SSR引物,构建受试大米样品的DNA指纹图谱,并研究和探讨这些寒地粳米品种的遗传差异。以期从分子水平上对各种粳稻品种进行准确有效的鉴定,初步解决目前稻米市场掺假严重的现象,同时也为黑龙江省寒地粳稻品种资源遗传多样性的保护和及优良水稻品种的培育提供理论依据。通过研究获得的如下结果:1.大米总DNA提取方法的优化。本实验在改进CTAB法的基础上优化了提取条件,结果表明经过改进后的DNA提取浓度和质量可以满足SSR实验的要求。2.SSR实验体系优化。本实验对SSR技术体系进行了优化,包括SSR-PCR体系、聚丙烯酰氨凝胶电泳体系以及银染显色体系优化。优化后的条件可以得到比较理想实验结果,有利于下一步进行SSR带型信息的统计和分析。3.核心SSR引物的筛选与DNA指纹图谱的构建。利用优化后的实验条件通过SSR实验筛选出19对扩增效果好、带型清晰并且多态性较好的核心SSR引物,并构建本实验的61份供试大米的DNA指纹数据库。4.利用得到的DNA指纹图谱信息对SSR引物进行多态性分析,结果表明:这19对核心SSR引物在61份粳米材料中扩增出71个等位基因。基于SSR标记的聚类分析结果表明:61份供试粳米可分为2大类,其中第一大类包含51份材料,这一大类又分成若干小类,可以区分所有材料亲缘关系。遗传多样性分析,结果表明核心SSR引物能提供的多态信息量不多,也说明了本实验大米材料之间的遗传多样性不够丰富。
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