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目的: 1.构建适用于鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B. pseudomallei）和泰国伯克霍尔德菌（Burkholderia thailandensis，B. thailandensis）的超级质谱数据库（SuperSpectra），并评价其对B. pseudomallei和B. thailandensis的快速鉴别能力，从而建立一种基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）检测B. pseudomallei和B. thailandensis的新方法。 2. 构建适用于鉴定产VIM型和SPM型金属酶铜绿假单胞菌（metallo-β-lactamase Pseudomonas aeruginosa，MBL-PA）的超级质谱数据库，并评价其对产VIM型和SPM型MBL-PA的快速鉴别能力，从而建立一种MALDI-TOF MS鉴别产VIM型和SPM型MBL-PA的新方法。 3.以脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis, PFGE）为金标准，评价MALDI-TOF MS在多重耐药铜绿假单胞菌（multi-drug resistantPseudomonas aeruginosa，MDR-PA）同源性分析中应用的可行性。 方法: 1.以细菌16SrRNA基因序列分析为菌种鉴定金标准，收集20株B. pseudomallei和1株B. thailandensisATCC700388作为建库菌株，对其进行MALDI-TOF MS鉴定和分析，创新性的利用SARAMIS数据库软件筛选其特征性的质谱峰，用以构建适用于鉴定B. pseudomallei和B. thailandensis的超级质谱数据库，并利用临床分离菌株对新建的超级质谱数据库进行验证分析。 2. 以MBL基因PCR扩增及序列分析为分型鉴定金标准，收集15株VIM型和15株SPM型MBL-PA作为建库菌株，对其进行MALDI-TOF MS鉴定和分析，创新性的利用SARAMIS数据库软件筛选其特征性的质谱峰，用以构建适用于鉴定产VIM型和SPM型MBL-PA的超级质谱数据库，并利用临床分离菌株对新建的超级质谱数据库进行验证分析。 3. 收集我院2017年ICU 病房分离的20株MDR-PA非重复菌株，利用VITEK MS SARAMIS软件对MDR-PA蛋白图谱进行聚类分析，同时对其进行PFGE同源性分析，并将两种分型方法所得的结果进行对比分析。 结果: 1.通过SARAMIS软件筛选出B.pseudomallei和B. thailandensis的质谱特征峰，成功构建了用于B. pseudomallei和B. thailandensis鉴定的超级质谱数据库，临床分离菌株验证结果显示26株B. pseudomallei，20株B. thailandensis，20株洋葱伯克霍尔德菌（ Burkholderia cepacia ， B. cepacia ）和 20 株多噬伯克霍尔德菌（ Burkholderia multivorans，B.multivorans）均通过MALDI-TOF MS获得准确的鉴定结果， MALDI-TOF MS对86株验证菌株的鉴定准确率为100%。 2. 通过SARAMIS软件筛选出产VIM型和SPM型MBL-PA的质谱特征峰，成功构建了用于产VIM型和产SPM型MBL-PA鉴定的超级质谱数据库，临床分离菌株验证结果显示MALDI-TOF MS对25株产VIM型MBL-PA验证菌株的鉴定准确率为100%，对25株产SPM型MBL-PA验证菌株的鉴定准确率为84%，其中有4株产SPM型MBL-PA验证菌株被错误鉴定为产VIM型MBL-PA。 3.MALDI-TOF MS同源性分析结果与PFGE同源性分析结果比较显示，20株MDR-PA通过MALDI-TOF MS聚类分析将其分为三大簇（Ⅰ型13株，Ⅱ型6株，Ⅲ型1株），而依据PFGE分型结果则将其分为6种亚型（A型2株，B型3株，C型4株，D型3株，E型7株，F型1株），其中有C型和E型中具有相同基因型菌株间，其MALDI-TOF MS亲缘性关系也较近，而其余4种亚型菌株间亲缘性比较，发现PFGE分型结果与MALDI-TOF MS聚类分析结果不完全相符。 结论: 1.本研究成功构建了MALDI-TOF MS快速准确鉴定B.pseudomallei和B. thailandensis的新技术，该技术不仅为鉴定B. pseudomallei和B. thailandensis提供了一种快速﹑简便﹑准确的检测方法，还为MALDI-TOF MS在未知数据库新菌种鉴定中的应用提供了一种全新的方法，具备非常广的应用前景。 2.本研究成功构建了MALDI-TOF MS快速鉴别产VIM型和产SPM型MBL-PA的新技术，具有操作简便﹑检测快速准确﹑高通量等优点，对MBL-PA分子流行病学研究有十分重要的意义，具备非常广的应用前景。 3.MALDI-TOF MS同源性分析与PFGE同源性分析进行比较，具有一定局限性，该技术质谱峰采集受人、机、料、法、环等因素的影响较大，目前没有统一的标准化操作流程，实验结果的重复性和可靠性还未得到多中心不同实验室的验证，尚难以准确定论MALDI-TOF MS同源性分析能力。