唑来膦酸对大鼠成骨细胞护骨素及肿瘤坏死因子α表达的影响

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目的观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素(OPG)及肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA表达的影响,探讨其在骨代谢中的作用,为促进骨质疏松性骨愈合提供依据。方法体外培养新生24h SD大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,用不同浓度的唑来膦酸进行干预,实验组细胞培养基中唑来膦酸的终浓度为10-5~10-9mol/L,对照组不加药,只加等量的细胞悬液和培养基。唑来膦酸干预后分别于第3,5,7天用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)测吸光度值,以检测唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖的影响;将成骨细胞予以不同浓度(10-7~10-9mol/L)的唑来膦酸干预72h,用硝基苯基质动力学法测各组细胞碱性磷酸酶的活性;将成骨细胞予以不同浓度(10-5~10-9mol/L)的唑来膦酸干预72h,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测各组细胞护骨素及肿瘤坏死因子αmRNA的表达。结果1.成骨细胞的形态学观察及鉴定:倒置相差显微镜下可见细胞接种培养48h后贴壁,贴壁生长的细胞呈三角形、长梭形和多角形等形态:碱性磷酸酶(ALP)染色后,大多数细胞内可见棕黑色颗粒;当钙化结节出现后,进行茜素红染色,可见红色结节。2.唑来膦酸浓度为10-5mol/L时明显抑制成骨细胞的增殖,而浓度为10-6~10-9mol/L时则不影响成骨细胞的增殖;唑来膦酸浓度为10-7~10-9mol/L时不影响成骨细胞的分化。3.唑来膦酸浓度为10-5~10-9mol/L时,成骨细胞护骨素mRNA的表达增加,而肿瘤坏死因子αmRNA的表达下降。结论唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞的增殖及分化,其可通过调节成骨细胞护骨素、肿瘤坏死因子αmRNA的表达,来发挥其抗骨吸收的作用。
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