香豆素羟胺衍生试剂HAHC在小分子醛类分析中的应用

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许多小分子醛类化合物有腐蚀性、刺激性、致突变性和致癌性,可能对人类身体健康造成严重的危害。人们迫切需要发展一种有效的分析方法以便快速对食品、环境以及生物样品中的醛类化合物进行监控。本论文中,我们对小分子醛类进行了介绍,对其检测方法进行了阐述和评估,在此基础上提出了研究工作的思路。醛基与N-取代羟胺基团之间可发生硝酮化反应,高选择性地生成反式硝酮产物,我们利用这一反应开发了一种新型香豆素N-取代羟胺类荧光衍生试剂,即4-羟胺基丁基-7-羟基香豆素(HAHC)。并以此发展了一种反应条件温和、简单、快速的硝酮化衍生方法,结合高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)与质谱法(MS),实现了不同基质中醛类化合物的高选择性、高灵敏度检测。主要研究结果如下:(1)我们建立了以HAHC为荧光试剂的硝酮化衍生方法,实现了对食品样品中3种糠醛类化合物(糠醛、5-羟甲基糠醛、5-甲基糠醛)的定性、定量分析。HAHC在水相中与糠醛室温下即可反应,生成稳定的硝酮衍生产物,衍生效率高达93%。在此基础上,我们成功的在葡萄干和奶粉样品中测定了糠醛类化合物含量,检测的回收率为94.7%-103.5%。相较常规检测方法,本方法反应条件温和,无需复杂前处理步骤,易于自动化且检测限低。(2)发展了一种水体样品中8种脂肪醛类化合物(乙醛、丙醛、丁醛、戊醛、己醛、庚醛、辛醛和壬醛)的分析检测方法。水样只需过滤后与HAHC溶液混合,室温下放置30 min即可直接利用HPLC-FLD检测,无需复杂的萃取或纯化步骤,检测限低至0.2-2.0 nM。我们成功在武汉市的4种水体样品中(自来水、游泳池水、湖水及雨水)检测到了8种脂肪醛,并对它们进行了准确的定性定量分析,发现自然水体中(雨水、湖水)中的醛类含量较人工水体中(游泳池水、自来水)的醛类含量较高,这暗示着湿沉降中的醛类污染物值得进一步的监控与分析。(3)采用HAHC柱前衍生法进一步对人体血清中的小分子脂肪醛进行了测定。在所有患者中(糖尿病和高血压患者)和健康人的血清中,我们检测到了5种醛类,其中包括乙醛、丙醛、丁醛、戊醛以及壬醛。我们发现在患者血清中乙醛含量明显高于健康人。这一结果预示着小分子脂肪醛可作为某些疾病的标志物,也为我们探索内源性醛类与糖尿病和高血压疾病的相关性研究打下坚实的基础。
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