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各种致病因素包括慢性病毒性肝炎、酗酒、药物相互作用、代谢紊乱等所致的慢性肝损伤均可引起肝纤维化，它的病理特征是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度沉积。肝星状细胞（hepatic stellate cell, HSC）是一种位于肝窦内皮细胞和肝细胞之间的非实质性细胞。它的激活是肝纤维化发生发展的中心环节，诱导活化的HSC凋亡可使肝纤维化发生逆转。国内外的一些研究显示，交感神经系统（sympathetic nervous system, SNS）参与控制和调整生物的活动，它可以保持器官和内外部环境的相对平衡，SNS也参与肝脏功能的调控。去甲肾上腺素（noradrenaline, NA）作为交感神经系统的主要神经递质，可能发挥重要作用。这为进一步理解肝纤维化的发生发展机制提供了坚实的理论基础。研究表明，肝脏和HSC中表达多种肾上腺素受体亚型，但具体表达何种亚型还不能确定，存在一定争议，需要进一步研究。也有实验表明，NA对HSC有促进增值和抑制凋亡的作用。本课题组前期实验已在整体水平上证实，NA有促进HSC增殖的作用，非选择性α-AR拮抗药酚妥拉明（phentolamine, PTL）能够抑制HSC增殖。本实验在此基础上，希望能够筛选出高表达的肾上腺素受体亚型，观察NA对HSC的作用，以及NA是否通过特异性受体发挥作用，找到药物特异性的作用靶点，增加药效，降低副作用，并进一步对NA影响HSC的机制进行初步探讨。目的：探讨α1肾上腺素受体（α1-adrenoceptor subtypes, α1-AR）亚型在大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）中的表达情况，来明确在HSC-T6中优势表达的肾上腺素受体亚型。并探讨交感神经递质NA和α1B-,α1D-AR亚型拮抗药对HSC-T6激活、增殖和ECM分泌的影响，进一步探讨NA对HSC-T6作用的信号通路，来明确NA影响HSC-T6的可能机制。方法：1．体外培养HSC-T6，分为以下13组：（1）对照组，为HSC-T6组；（2） NA（10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L）组；（3）α1B-AR拮抗药氯乙基可乐定（Chloroethylclonidine Dihydrochloride, CEC10-5mol/L）组；（4）α1D-AR拮抗药BMY7378（10-5mol/L）组；（5）Gα抑制剂百日咳毒素（pertussis toxin, PT10-5mol/L）组；（6）蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）抑制剂RO-32-0432（10-5mol/L）组；（7）磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂LY294002（10-5mol/L）组；（8）AKT抑制剂GSK690693（10-5mol/L）组。2．细胞免疫组化法和反转录酶-聚合酶链式反应（reverse transcription-polymerasechain reaction, RT-PCR）法测定α1A-, α1B-, α1D-AR在HSC-T6中的表达位置及表达量。3．四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测定细胞增殖情况，并通过线性回归求得NA的半数有效浓度（EC50）。4．蛋白免疫印迹法（western blot）、RT-PCR法测定加入激动药、拮抗药和信号分子抑制剂后，HSC-T6的活化指标：转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况；ECM分泌指标：金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）、I型胶原（ColΙ）的表达情况。5．Western blot、RT-PCR法测定PKC-PI3K-AKT信号通路中信号分子PKC、PI3K的表达和AKT的磷酸化。结果：1． HSC-T6表达α1-AR的情况α1-AR多表达于HSC-T6细胞膜上，且α1B-, α1D-AR表达较多，α1A-AR未检测到表达。2． NA及特异性受体亚型拮抗药对HSC-T6增殖的影响NA浓度依赖性促HSC-T6增殖，EC50为277nmol/L，加入α1B-AR、α1D-AR拮抗药，细胞增殖均受到明显抑制，且α1B-AR对NA促HSC-T6增殖的抑制作用为非竞争性拮抗，α1D-AR的作用为竞争性拮抗。3． NA、α1肾上腺素受体亚型拮抗药和多种信号通路信号分子抑制剂对HSC-T6激活和ECM分泌的影响NA促进HSC-T6的TGF-β1、α-SMA、TIMP-1和ColΙ表达；加入α1B-AR、α1D-AR拮抗药及Gα蛋白偶联的PKC-PI3K-AKT信号通路各信号分子抑制剂后，可显著下调它们的的表达。4． NA和α1肾上腺素受体亚型拮抗药对PKC-PI3K-AKT信号通路中信号分子表达的影响NA促进PKC-PI3K-AKT信号通路中信号分子PKC、PI3K的表达和AKT的磷酸化，加入α1B-AR、α1D-AR拮抗药可显著抑制PKC、PI3K的表达，降低AKT的磷酸化。结论：1．HSC-T6表达α1B-AR和α1D-AR两种α1-AR亚型，表达部位在细胞膜，表达水平α1B-AR多于α1D-AR。2．交感神经递质NA通过作用于α1B-AR、α1D-AR促进HSC-T6激活、增殖和ECM分泌，并且呈现浓度依赖性。3．NA促进HSC-T6增殖的作用具有浓度依赖性，其EC50为277nmol/L，α1D-AR拮抗药对NA促HSC-T6增殖的抑制作用为竞争性拮抗，α1B-AR拮抗药的作用为非竞争性拮抗。4．NA激活Gα蛋白偶联PKC-PI3K-AKT信号通路是促进HSC-T6激活、增殖和分泌ECM的机制之一。