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纳米材料由于具有传统材料所不具备的性质,特别是在光、电、磁等方面的独特性质,因此纳米材料在生命科学及医学等领域得到了广泛应用。尤其是在生化分析方面,由于纳米材料具有特有的信号增强作用,以及生物相容性方面的独特优势,与生物分子间相互识别的特异性相结合,因此,不仅使传统的生化分析手段具有很高的特异性和灵敏度,而且发展了一些新的分析测试方法。本论文工作也正是基于此而展开。
1.基于金纳米颗粒的DNA甲基化检测新方法的研究
DNA甲基化是生物体内一个重要的生化反应,由DNA甲基化酶催化。本文利用DNA甲基化酶和甲基化敏感性限制性内切酶操纵金纳米颗粒表面修饰的DNA,实现了甲基化过程的实时动态检测。作者首先设计了含有特定回文序列的双链DNA,然后将这段DNA修饰在金纳米颗粒表面,由于DNA的这个序列能够被Dam甲基化酶识别从而甲基化,而甲基化的DNA会被甲基化敏感性限制性内切酶DpnⅠ识别,并在同一个位点切断DNA,使得部分DNA从金纳米颗粒表面释放下来,因此金纳米颗粒由于失去了DNA双链的保护,导致金纳米颗粒的耐盐性降低,变得不稳定而发生聚集,使得会纳米颗粒溶液的颜色由红色变为蓝色,从而可发展一种检测DNA甲基化新方法。这一方法也可以用于Dam甲基化酶活性的检测,并能有效地用于筛选Dam甲基化酶的抑制剂。
2.基于CdS纳米颗粒检测乳腺癌细胞新方法的研究
乳腺癌的准确检测具有重要的意义,不仅有利于确诊疾病的发展程度,而且有助于后期治疗方案的制定。传统的检测方法依靠单一的肿瘤标志物,所以特异性不高。本文通过同时识别两种细胞表面的标志物:MUC1和癌胚抗原,从而提出了一种准确检测乳腺癌细胞的电化学免疫检测方法,而且,该方法的特异性和灵敏度也较高,在临床诊断方面具有很大的应用潜力。实验结果表明,只有当两种细胞标志物同时存在的情况下,才能得到CdS纳米颗粒的溶出伏安电化学信号,而且,该方法能将乳腺癌细胞与其它种类细胞,如急性白血病细胞和正常胰岛beta细胞区分开。进一步研究发现,细胞浓度在104到107 cell mL-1之间时,检测信号与细胞浓度呈现出良好的线性关系,为乳腺癌细胞的定量检测打下了基础。