第一部分PPARγ蛋白在GDM孕妇及正常妊娠孕妇外周血、新生儿脐血及羊水中的表达目的：通过检测GDM孕妇及正常妊娠孕妇外周血、新生儿脐血及羊水中PPARγ蛋白的表达,了解PPARγ是否在人体液组织内表达,并比较其在GDM孕妇与正常妊娠孕妇的体外表达有无差异。方法：选取在复旦大学附属妇产科医院产科2012年10-11月足月妊娠行选择性剖宫产的GDM孕妇和正常妊娠孕妇各30例,孕38-41周期间选择性剖宫产手术时采集孕妇外周血、新生儿脐血及羊水。ELLSA方法检测GDM孕妇及正常妊娠孕妇外周血、新生儿脐血及羊水中PPARγ蛋白的表达。结果：GDM足月妊娠孕妇血浆中PPARγ蛋白浓度(0.201ng/ml)高于正常足月孕妇血浆中PPARγ蛋白浓度(0.153ng/ml),其差异有显著性(P<0.001)。 GDM足月妊娠新生儿脐带血浆及羊水中PPARγ蛋白浓度与正常足月孕妇新生儿脐带血浆及羊水中PPARγ蛋白浓度,无统计学差异。结论：本研究首次发现了细胞内的核转录因子PPARγ蛋白在细胞外液即人体液组织中的表达,我们推测PPARγ可能通过一定的机制由细胞内释放至细胞外,并且为了维持胎儿体内及羊水中PPARγ蛋白的稳态,GDM孕妇外周血的PPARγ蛋白反应性的增高,但PPARγ蛋白影响母胎界面细胞功能需要进一步研究。第二部分PPARγ蛋白在GDM孕妇胎盘、羊膜、绒毛膜的定位目的：通过分析GDM孕妇胎盘、羊膜、绒毛膜上PPARγ蛋白的定位表达,了解PPARγ蛋白在母胎界面可能的功能。方法：选取在复旦大学附属妇产科医院产科2012年10-11月足月妊娠行选择性剖宫产的GDM孕妇的胎盘、羊膜、绒毛膜组织各5例。免疫组化方法检测PPARγ蛋白的表达。结果：在GDM孕妇的胎盘组织中,PPARγ阳性表达,主要表达在合体滋养细胞核,细胞滋养细胞未见明显表达。在GDM孕妇羊膜组织中,PPARγ阳性表达,表达主要位于羊膜上皮层中的单层立方上皮细胞的细胞核内、成纤维细胞层中的成纤维细胞细胞核内及无定形基质内。在GDM孕妇绒毛膜组织中,PPARγ阳性表达,表达主要位于网状层的细胞的细胞膜上及成纤维细胞细胞核内。结论：在胎盘层面,PPARγ蛋白定位于胎盘的合体滋养细胞核、细胞质,可见PPARγ蛋白不仅定位于细胞核内,有可能通过细胞损伤分泌到细胞质、细胞外的可能,进一步支持了临床实验过程中脐血血浆、羊水中检测到PPARγ蛋白的表达。在羊膜、绒毛膜层面,PPARγ蛋白定位于羊膜上皮细胞核、无定型基质内及绒毛膜网状层细胞的细胞膜上,进一步支持了胎膜的分泌功能,有可能PPARγ蛋白通过胎膜的分泌功能分泌进入羊水。由此可见PPARγ蛋白可能通过内分泌分泌到外周循环,进而发挥作用。第三部分PPARγ蛋白对细胞糖、脂代谢能力的影响目的：建立滋养细胞和子宫内膜基质细胞的体外诱导的共培养体系,模拟母胎界面细胞间的相互作用,通过改变PPARγ蛋白在共培养体系中的浓度,分析滋养细胞合体化相关分子、子宫内膜基质细胞容受性相关分子以及两种细胞糖、脂代谢能力的改变,进一步了解PPARγ是否发挥母胎细胞交互作用的调节,其调节作用是否影响细胞的糖、脂代谢功能的改变。方法：采用人绒癌滋养细胞株(Be Wo细胞)及子宫内膜基质细胞(ESC细胞)建立细胞共培养体系,在共培养的培养液中加入纯化的PPARγ蛋白,改变细胞培养微环境中游离PPARγ蛋白的浓度,分别设立PPARγ蛋白浓度为0.25ng/μL、5ng/μL、10ng/μL。RT-PCR方法检测细胞葡萄糖转运体1(GLUT1)、硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)的表达,检测滋养细胞合体化分子syncytin的表达,检测子宫内膜基质细胞容受性相关分子血管内皮生长因子(VEGF)的表达。油红O染色法观察共培养体系中BeWo细胞和ESC细胞对脂质的储存能力改变。结果：1)BeWo细胞GLUT1mRNA、SCD mRNA的表达：单独培养体系中,在各浓度PPARγ作用下,BeWo细胞表达Glut1mRNA、SCD mRNA相对表达率均无差异性。在共培养体系中,在PPARγ蛋白浓度为10ng/ml、5ng/ml时,BeWo细胞表达Glut1mRNA相对表达率相对空白对照组有显著性增高(P<0.05), SCD mRNA相对表达率随着PPARγ蛋白增加有一定增高趋势,但是无统计学差异。共培养体系相对单独培养体系BeWo细胞Glutl mRNA、SCD mRNA相对表达率数值上有一定升高,仅在PPARγ蛋白浓度为10ng/m, SCD mRNA相对表达率的升高有统计学差异(P<0.05)。2)ESC细胞中GLUT1mRNA、SCD mRNA的表达：单独培养体系、共培养体系中ESC细胞表达Glutl mRNA、SCD mRNA无差异性。3) BeWo细胞内脂质储存能力：在共培养体系中,随着蛋白浓度的调高,油红O染色发现,BeWo细胞质内脂肪的含量增多,PPARγ蛋白的浓度为10ng/ml的时候,BeWo细胞质内脂肪的含量明显增多。4)ESC细胞内脂质储存能力：在共培养体系中,随着蛋白浓度的调高,油红O染色发现,ESC细胞质内脂肪的含量增多,PPARγ蛋白的浓度为10ng/ml的时候,ESC细胞质内脂肪的含量明显增多。5) BeWo细胞合体化相关因子的表达：单独培养体系中,随着蛋白浓度的调高,RT-PCR检钡BeWo细胞表达Syncytin mRNA有一定增加趋势,但无统计学差异。共培养体系中,Syncytin mRNA的相对表达率随着蛋白浓度的调高,没有趋向性。6)ESC细胞容受性相关因子的表达：单独培养体系、共培养体系中ESC细胞表达VEGF mRNA无差异性。结论：在BeWo细胞和ESC细胞糖脂转运代谢的研究发现,仅在共培养体系中,发现PPARγ蛋白浓度为5ng/ml、10ng/ml时,BeWo细胞表达Glutl mRNA相对表达率相对空白对照组有显著性增高,且共培养体系相对单独培养体系中Glutl mRNA、SCD mRNA相对表达率有升高趋势,PPARγ蛋白浓度为10ng/ml时,SCDmRNA相对表达率的升高有统计学差异,有可能PPARγ蛋白依靠BeWo细胞和ESC细胞之间的相互影响发挥调节细胞糖代谢的作用。油红O染色发现BeWo细胞和ESC细胞内脂滴的累积随着PPARγ蛋白的浓度的增高有一定增加,随着PPARγ蛋白的浓度的增高,BeWo细胞和ESC细胞对于脂肪的储存能力明显提高,表明PPARγ蛋白可以促进细胞改善细胞脂肪代谢,有可能可以改善外周循环中高血脂的情况。BeWo细胞合体化因子syncytin的分泌在单独培养体系梯形增加,且光镜下BeWo细胞合体化增加,表明PPARγ蛋白作用于BeWo细胞,一定程度上促进了滋养细胞的合体化,但其量的积累尚未达到质的变化,因此虽未见统计学差异,但仍表明在PPARγ蛋白作用下BeWo细胞的合体化仍处于较好的状态,未出现滋养细胞融合异常。而在共培养体系随着PPARγ蛋白浓度的增高,BeWo细胞表达Syncytin mRNA水平无差异,表明有可能在ESC细胞的影响,BeWo细胞融合异常。ESC细胞的VEGF mRNA表达率,未随着PPARγ蛋白浓度的增高而发生变化,说明细胞外液的PPARγ可能对子宫内膜细胞的容受性无明显影响。综上所述,可见PPARγ蛋白促进共培养体系中滋养细胞糖转运蛋白GULT1和脂代谢蛋白SCD的表达,并促进共培养体系两种细胞对脂质的摄取,而对两种细胞合体化分子Syncytin和容受性分子VEGF无明显影响,推测细胞外液的PPARγ蛋白可能影响了母胎界面细胞的糖脂转运功能,可以促进细胞对脂质的摄取。结合第一部分的临床试验结果,考虑GDM孕妇外周血PPARγ增高可能是代偿性增高,可以增加母胎界面细胞对糖和脂的摄取转运,以维持胎儿的稳态。