钩藤碱对氧糖剥离后大鼠海马区星形胶质细胞PRDX1和TGF-β1 mRNA表达的影响

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目的观察在氧糖剥离(Oxygen-glucose deprivation,OGD)的条件下,星形胶质细胞过氧化物氧化还原酶-1(PRDX1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA的表达情况,并观察钩藤碱对氧糖剥离后星形胶质细胞过氧化物氧化还原酶-1(PRDX1)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法取出生后72小时以内的SD大鼠,酒精消毒后于超净台上提取海马组织,进行原代细胞培养,通过胰酶消化法提高细胞纯度。待细胞生长至第四代,通过化学免疫荧光法鉴定所获得的细胞中星形胶质细胞纯度。设置空白对照组、氧糖剥离组、钩藤碱高剂量组(0.2mg/ml)和钩藤碱低剂量组(0.02mg/ml),用厌氧罐及无糖平衡盐溶液建立的氧糖剥离模型模拟大脑的缺血缺氧1h,通过设置高低浓度钩藤碱给药组,观察氧糖剥离1h后不同浓度的钩藤碱对星形胶质细胞的影响情况。复氧24h后提取各组细胞的总RNA,通过荧光定量PCR测定各组细胞中的PRDX1、TGF-β1 mRNA的表达情况。结果1.海马区所提取的细胞,平均每7-9天可铺满瓶底,镜下观察以星形胶质细胞为主。2.通过胰酶消化提纯后四代细胞,其星形胶质细胞的纯度可达90%以上。3.氧糖剥离1h/复氧24h,星形胶质细胞的PRDX1、TGF-β1 mRNA的表达水平出现明显上调。4.钩藤碱高剂量组与氧糖剥离组相比较,钩藤碱干预后的星形胶质细胞中PRDX1、TGF-β1 mRNA表达下调;钩藤碱低剂量组与氧糖剥离组相比较,钩藤碱干预后的星形胶质细胞中PRDX1、TGF-β1 mRNA表达下调;钩藤碱高剂量组对星形胶质细胞中PRDX1 mRNA的表达水平的下调作用效果较低剂量组更为显著;钩藤碱高剂量组对星形胶质细胞中TGF-β1 mRNA的表达水平的下调作用效果较低剂量组更为显著。结论1.经过胰酶消化提纯的星形胶质细胞纯度较高;2.氧糖剥离1h/复氧24h,星形胶质细胞中PRDX1、TGF-β1的mRNA的表达含量增加;3.钩藤碱可以下调氧糖剥1 h/复氧24h后星形胶质细胞中PRDX1、TGF-β1的mRNA的表达含量。
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