目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖、迁移和表型转换的作用及其调控机制,为心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的早期干预和治疗提供精准靶点。方法:(1)通过文献数据选出一条新的lncRNA-PEBP1P2,同时采用生物信息学方法预测其蛋白编码能力。(2)通过qRT-PCR检测PEBP1P2在不同细胞系,冠心病患者外周血及动脉粥样硬化斑块中的表达。(3)设计合成PEBP1P2的小干扰RNA,并通过qRT-PCR验证其在VSMCs中的敲低效率。在VSMCs中使用小干扰RNA敲低PEBP1P2后,采用EdU和CCK-8实验检测细胞的增殖,划痕和Transwell实验检测细胞的迁移,qRT-PCR及Western blotting检测VSMCs收缩基因α-SMA、CNN1、SMHC及CCND1的表达。(4)构建PEBP1P2过表达载体,并通过qRT-PCR在VSMCs中验证其过表达效率。在VSMCs中转染过表达载体后,使用EdU和CCK-8实验检测细胞的增殖,划痕和Transwell实验检测细胞的迁移,qRT-PCR及Western blotting检测VSMCs收缩基因α-SMA、CNN1、SMHC及CCND1的表达。(5)采用qRT-PCR检测PEBP1P2在PDGF-BB诱导的VSMCs中的表达量。并采用EdU和CCK-8实验检测PEBP1P2过表达后对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的影响,划痕和Transwell实验检测细胞的迁移,及Western blotting检测VSMCs收缩基因及CCND1的表达。(6)通过qRT-PCR检测在PEBP1P2敲低或过表达后其临近基因RETSAT、CAPG、ELMOD3、TCF7L1和TGOLN2的表达。(7)使用生物信息学方法预测PEBP1P2的下游结合蛋白及其与结合蛋白的结合能力,同时用RNA结合蛋白免疫共沉淀实验进一步验证预测结果。并用Western blotting检测在PEBP1P2敲低或过表达后其下游结合蛋白CDK9的表达。(8)设计合成CDK9的小干扰RNA,并验证其在VSMCs中的敲低效率。采用qRT-PCR验证其在VSMCs中的敲低效率。采用CCK-8、划痕、Transwell和Western blotting实验检测CDK9敲低及PEBP1P2、CDK9共同敲低后VSMCs的生物学功能。(9)Western blotting检测CDK9在PDGFBB诱导的VSMCs中的表达量,同时通过CCK-8、Transwell检测CDK9敲低后对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖、迁移的影响。(10)构建CDK9过表达载体,并通过Western blotting验证其在VSMCs中的表达效率。采用CCK-8、划痕、Transwell和Western blotting实验检测CDK9过表达及PEBP1P2、CDK9共同过表达后VSMCs的生物学功能。结果:(1)EBP1P2在VSMCs中高丰度表达,并在PDGF-BB刺激的VSMCs、冠心病患者外周血及动脉粥样硬化斑块中表达下调。(2)在PEBP1P2敲低后,VSMCs增殖、迁移显著增强,并促进表型转换;而PEBP1P2过表达后,能明显抑制VSMCs增殖、迁移及表型转换。并且,PEBP1P2过表达能明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖、迁移及表型转换。(3)PEBP1P2通过与CDK9直接结合而发挥调控作用。(4)敲低CDK9可明显抑制VSMCs增殖、迁移及表型转换;过表达CDK9可显著增强VSMCs增殖、迁移及表型转换;且上述过程可被PEBP1P2敲低或过表达逆转。结论:我们筛选鉴定了一条新的lncRNA-PEBP1P2,其通过直接结合下游蛋白CDK9在VSMCs增殖、迁移及表型转换中发挥重要调控作用,且初步探索它的临床意义。本研究丰富了VSMCs的功能调控和机制,为CVD的诊治提供了新的观点和新的靶标。