【摘 要】
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背景:子宫内膜异位症简称内异症,是指子宫内膜组织出现在子宫体以外的部位,多见于育龄期妇女,主要表现为继发性痛经进行性加重、月经过多或周期紊乱、性交疼痛及不孕等。内异症在不孕妇女中的发病率高达50%,除根治性手术外,内异症的复发率较高,给患者造成极大地身心影响和经济负担,是育龄期妇女长期的主要健康问题。内异症虽为良性疾病,但有类似肿瘤的生物学行为,如粘附、侵袭、转移。内异症发病机制尚不明确,已提出了
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背景:子宫内膜异位症简称内异症,是指子宫内膜组织出现在子宫体以外的部位,多见于育龄期妇女,主要表现为继发性痛经进行性加重、月经过多或周期紊乱、性交疼痛及不孕等。内异症在不孕妇女中的发病率高达50%,除根治性手术外,内异症的复发率较高,给患者造成极大地身心影响和经济负担,是育龄期妇女长期的主要健康问题。内异症虽为良性疾病,但有类似肿瘤的生物学行为,如粘附、侵袭、转移。内异症发病机制尚不明确,已提出了多种学说。目前,干细胞学说是重点研究的方向,认为子宫内膜干/祖细胞是引起内异症病变起源的细胞。课题组前期通过高通量测序研究发现内异症患者的经血源干细胞与正常女性的经血源干细胞存在基因表达差异,其中一个表达差异显著的基因为L-型电压门控钙通道γ亚基6（CACNG6）。本研究通过比较内异症患者和正常女性经血源干细胞中CACNG6基因的表达差异及其是否影响内异症患者经血源干细胞的生物学特性,并探索其可能的作用机制。方法:课题组前期通过高通量测序发现CACNG6在内异症患者和正常女性的经血源干细胞中的表达具有差异。本研究通过流式细胞术鉴定内异症患者和正常女性经血源干细胞的干性相关表面标记。通过实时PCR和免疫荧光验证CACNG6在内异症患者经血源干细胞和正常女性经血源干细胞中的表达水平。采用CCK8法、伤口愈合实验、TUNEL染色免疫荧光实验比较内异症患者和正常女性经血源干细胞的增殖、迁移和凋亡是否有差异。使用siRNA敲除内异症患者经血源干细胞中CACNG6的表达后,探索内异症经血源干细胞的迁移能力是否有所改变,并通过Western Blot实验探索可能的相关通路的蛋白表达变化。结果:1、本研究经RT-PCR和免疫荧光证实CACNG6在内异症患者经血源干细胞中的表达高于正常女性经血源干细胞。2、本研究通过流式细胞术、CCK8法和TUNEL凋亡免疫荧光检测实验,发现两者经血源干细胞在干性表面标记表达、细胞增殖与凋亡方面相似。3、通过伤口愈合实验发现内异症患者经血源干细胞的迁移能力明显强于正常女性经血源干细胞。4、使用siRNA沉默内异症经血源干细胞中CACNG6的表达和钙通道抑制剂—氨氯地平后,内异症经血源干细胞的迁移能力明显降低,并且低于正常女性的经血源干细胞的迁移能力。5、通过Western Blot实验发现内异症患者经血源干细胞β-catenin和LEF1的蛋白水平高于正常女性经血源干细胞,使用siRNA沉默内异症患者经血源干细胞中CACNG6的表达后,β-catenin和LEF1的蛋白表达水平下调。结论:内异症患者的经血源干细胞的迁移能力强于正常女性的经血源干细胞。与L-型电压门控钙通道相关的基因CACNG6在内异症患者经血源干细胞中表达上调。将CACNG6基因沉默或使用L-型电压门控钙通道抑制剂,内异症患者经血源干细胞的迁移能力显著降低。此外,我们发现抑制CACNG6可能通过抑制β-catenin/LEF1分子途径,降低内异症经血源干细胞的迁移能力。为研究内异症发病机制提供初步的理论证据。
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