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原花色素是一类黄酮化合物,它们广泛地分布在多种植物体内,具有防御生物和非生物胁迫的作用。在大麦中,它们只在发育中的种皮内特异地合成并积累。在发酵酿制啤酒的过程中,原花色素随着麦芽浸汁进入啤酒,在啤酒的储运过程中遇到低温环境时,就会与蛋白质结合形成凝聚沉淀,而影响啤酒品质。在工业生产中,一般采取PVPP(聚乙烯基聚吡咯烷酮)处理,除去啤酒中的原花色素。在啤酒大麦的育种研究工作中,培育不含原花色素的大麦生产品种,一直是人们追求的重要目标之一。经过多年研究,在Carlsberg实验室,通过诱变方法,得到了大量无花色素突变体。但是,由于基因作用的多效性和复杂性,最关键的控制无色花色素母体聚合成原花色素的生化途径和遗传控制因子一直未被人们完全发现。DNA芯片技术是近几年发展起来一种高速、高通量、高度精确的DNA检测技术,它可被用于研究基因的差异表达。在本研究中,1.以野生型大麦Morex的种皮+果皮mRNA为材料,经过反转录成cDNA、包装入噬菌体粘粒中,建立cDNA文库;2.用粘粒转化适当的大肠杆菌株系,涂板转化的细菌,得到大量单克隆。3.用单克隆的PCR扩增片段作为待测样品,打印在玻璃载体上,成为DNA芯片,可用于差异表达分析。4.用野生型大麦Triumph和无花色素突变型Ant13-152的种皮+果皮mRNA,经反转录和荧光色素标记为cDNA探针,经过分子杂交、共聚焦激光显微镜扫描,得到被标记样品的激发荧光图像。5.应用标准化处理和差异分析,发现大量在野生型和突变型中表达有明显差异的cDNA克隆,有助于通过测序、分析发现新的基因。主要结果如下:一.建立了野生型大麦Morex的种皮+果皮cDNA文库,并高效包装入粘粒中,具有定向插入cDNA片段、不易丢失大片段、便于长期保存等优点,可以随时用于转染大肠杆菌和遗传学分析。二.首次应用先进的DNA芯片技术,研究大麦种皮特异基因的差异表达。发现了大量差异表达基因克隆,其中25个野生型特异表达基因克隆和45个突变型特异表达基因克隆,有希望从中发现特异表达基因。