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戈登氏菌（Gordonia）是一类稀有放线菌,在本课题组的前期实验中,我们已经从美洲大蠊（Periplaneta americana）的肠道内分离得到了15株戈登氏菌。本文以白色念珠菌（ATCC 10231）为指示菌对这15株戈登氏放线菌进行了抗真菌活性的初步筛选,发现菌株WA8-44抗白色念珠菌的活性较强且稳定性良好。在此基础上,以白色念珠菌（ATCC 10231）、黑曲霉（ATCC 16404）、烟曲霉（ATCC 96918）和红色毛癣菌（ATCC 60836）四种人体常见致病真菌为指示菌测定了其抗真菌谱。通过形态学鉴定、分子生物学鉴定和系统发育树分析对菌株进行了表征。通过单因素分析和正交试验优化菌株WA8-44的液体发酵条件,扩大了发酵规模。采用生物活性追踪与经典化学分离提取方法相结合的手段对菌株的抗真菌活性次级代谢产物进行了初步研究。主要实验结果如下:1、15株戈登氏放线菌抗真菌活性的筛选:从美洲大蠊肠道中分离得到的15株戈登氏菌以白色念珠菌为指示菌进行抗真菌活性的测定,其中有6株戈登氏菌对白色念珠菌具有不同程度的抑制作用,菌株WA8-44活性较强、且稳定好,所以选择菌株WA8-44作为后续的研究对象。2、菌株WA8-44的抗真菌谱及系统发育树分析:菌株WA8-44的抗真菌谱以白色念珠菌、黑曲霉、烟曲霉和红色毛癣菌四种常见致病真菌为指示菌进行确定。结果表明,该菌株对上述四种真菌具有不同程度的抑制活性。利用分类鉴定学方法,经过菌落形态的观察、革兰氏染色及扫描电子显微镜对菌株进行了形态学的鉴定。与16S rDNA系统发育树分析相结合,得出菌株WA8-44与一株来源于红树林的戈登氏菌（Gordonia didemni）的同源性为100%,最终鉴定出该菌株为戈登氏菌,将其基因序列提交至GenBank中进行注册,获得登录编号MH605445。3、菌株WA8-44发酵条件的优化及发酵规模的扩大:通过单因素正交试验来优化菌株发酵的条件,以白色念珠菌作为指示菌,通过牛津杯法和滤纸法测定具有不同影响因子的发酵液的抗真菌活性。最终确定了菌株WA8-44的最优发酵条件为采用ISP2培养基,每500mL装300mL培养基,初始pH为7在28℃条件下发酵6天。根据该条件,将发酵放大至60L,并获得足够量的粗提取物以供使用。4、抗真菌活性化合物的分离纯化及结构鉴定:用两种不同极性的有机试剂乙酸乙酯和正丁醇分别将戈登氏菌WA8-44的发酵液萃取三次,并用丙酮浸提菌丝体。以白色念珠菌为指示菌进行生物活性追踪,得出戈登氏菌WA8-44的抗真菌活性部位为乙酸乙酯部位。利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析、MCI柱层析等分离手段对乙酸乙酯活性部位的粗提物进行了多次重复的分离纯化,最后,通过半制备HPLC进行制备,得到单体化合物。通过现代光谱分析技术如NMR,MS,IR及UV分析和鉴定分离的单体化合物的结构。共获得8个化合物:放线菌素D,放线菌素X2,Collismycin A、邻苯二甲酸二丁酯、环状（亮氨酸-亮氨酸）二肽、环状（脯氨酸-甘氨酸）二肽、胸腺嘧啶、尿嘧啶。上述8个化合物均是从戈登氏放线菌中首次分离得到。5、化合物抗菌活性的评价:测定了8个化合物的抗真菌活性,结果表明放线菌素D、放线菌素X2及Collismycin A对白色念珠菌有较强的抑制活性,对白色念珠菌的MIC值分别为4μg/mL、32μg/mL、2μg/mL。但是其他化合物无抗真菌活性。此外,上述3个化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）、金黄色葡萄球菌（ATCC 25213）、枯草芽孢杆菌（ATCC 6633）和大肠埃希菌（ATCC 25922）也具有不同程度的抑制活性。