鲍鱼脏器多糖的分离纯化及结构研究

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本文采用碱性蛋白酶为水解酶,从鲍鱼脏器中提取出多糖(AHP),经过进一步的分离纯化得到一种分子量和极性均一的多糖组分(AHP-12),并对这种多糖组分的分子量、组成和一级结构进行了研究。在采用胃蛋白酶酶解和Sevage法结合的基础上,再采用链霉蛋白酶和Sevage法结合脱除鲍鱼脏器粗多糖中的蛋白;经透析、冻融除去残留的游离蛋白,冷冻干燥后得到鲍鱼脏器多糖,其蛋白质含量为16.93%。脱蛋白后的鲍鱼脏器多糖经Sephadex G-100凝胶柱层析和DEAE-cellulose52离子交换柱层析分离纯化得到多糖组分AHP-12,经高效液相色谱、琼脂糖凝胶电泳及光谱鉴定确定为均一多糖。其相对分子质量约为300kDa,是由鼠李糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成的一种含硫酸酯多糖,并有氨基糖存在,单糖组成摩尔比为Rha:Fuc:Gal:Man:Xyl=11.6:11.6:9.6:1.3:1,硫酸基含量为13.07%,氨基己糖的含量为4.98%,其中氨基半乳糖的含量为3.54%。采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和气相色谱-质谱联用等多种方法相结合测定了AHP-12的一级结构。结果表明:(1)AHP-12的主链重复单位由Fuc:Gal按1:1构成;(2)主链中Gal存在形式为不可被氧化的Gal(1→3),Fuc存在形式为可被氧化的Fuc (1→4);(3) Gal (1→3)间隔排列在可被彻底氧化的Fuc(1→4)之间;(4) Xyl (1→2,3)、Man (1→4)应该存在于侧链当中,而主链籍由Xy1(1→2,3)进行分支;(5) G1cN、Xy1为(1→)键型,所以它们应该位于末端。由此推测AHP-12的结构应为:
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