药物基因组学以药物效应及安全性为目标，将个体基因的多态性与药物效应的多样性紧密的联系在一起，通过研究遗传因素对药物效应的影响，针对不同个体携带的基因型，给予不同的药物或剂量，以达到个体化治疗的目的。　　 非小细胞肺癌是威胁人类生命与健康最严重的恶性肿瘤之一，由于其起病隐匿、进展迅速，因此有50％-60％的NSCLC患者在发现时已进入晚期或存在广泛转移。对于晚期NSCLC，尚缺乏有效的治疗手段，通常以延长生存期，改善生活质量为目标。而以铂类为基础联合第三代细胞毒药物的治疗较以往二代药物能明显延长中位生存期，提高1年生存率。既便如此，联合治疗对于晚期NSCLC的有效率也只有20～35％，中位生存期仅8～10个月。并且，相同的化疗方案在不同个体的使用中常常出现两个完全相反的临床效应。这一方面与肿瘤的恶性程度及进展速度相关，另一方面，个体的基因多态性起到了十分重要的因素。　　 1建立XRCC1194，399多重PCR方法　　 铂类药物是晚期NSCLC化疗的基础用药，患者对铂类药物的化疗敏感性与其自身DNA修复能力密切相关。XRCC1基因参与DNA修复系统的重要环节，其第6外显子194Arg/Trp氨基酸错义，以及第10外显子399 Gln/Arg氨基酸错义，可使XRCC1活性降低，减弱其对Pt-DNA结合物的修复能力，从而增强铂类药物的化疗疗效。本研究首先建立了XRCC1194与399两个多态性位点的单管多重PCR方法，通过设计特异性引物以及逐步优化PCR方法，完成对两个位点的一步法基因扩增，将扩增产物进行2％琼脂糖凝胶电泳进行分离，两位点的片段长度分别为491 bp和615 bp，分离度高，可进行切胶纯化。将提取的DNA进行直接测序判断基因分型。　　 2建立CDA*3，CYP1B1*3，UGT1A1*6多重PCR方法　　 本研究还建立了CDA*3、CYP1B1*3、UGT1A1*63个多态性位点的单管多重PCR方法。CDA是吉西他滨的体内主要灭活酶，CDA*3(208G>A，A70T)突变可引起酶活性的降低，减少吉西他滨的灭活而导致严重的血液学毒性。CYP1B1是肝药酶系统中的一员，CYP1B1*3(Leu432 Val)的多态性与NSCLC患者接受紫杉醇化疗后的中位生存期显著相关。UGT是存在于人体肝脏及肝外组织的另一个主要代谢酶系统，UGT1A1是UGT家族重要一员，参与伊立替康的体内代谢灭活过程。UGT1A1*6基因突变可使亚洲人群在使用伊立替康时产生Ⅳ度粒细胞减少症及严重腹泻。在建立CDA*3、CYP1B1*3、UGT1A1*63个多态性位点的多重PCR方法中，根据各自的突变位点设计特异性引物，同时对扩增效果较差的UGT1A1*6基因，采用调整引物的加入量以及增加循环次数，提高3个扩增产物片段的浓度。经2％琼脂糖凝胶电泳分离，3个产物片段长度分别为354 bp、149 bp以及203 bp，采用切胶纯化后直接测序，确定基因分型。　　 3 XRCC1基因多态性与铂类化疗敏感性的关系研究　　 目的：研究XRCC1194Arg/Trp，399 Gln/Arg多态性与NSCLC患者对铂类为基础的联合化疗的敏感性的关系。　　 方法：收集我院2007年至今54例NSCLCⅢB期、Ⅳ期以及手术后复发或转移的NSCLC患者，所有患者接受铂类为基础的化疗方案，提取患者外周白细胞DNA，采用多重PCR对XRCC1194，399两个多态性位点同时扩增，对扩增产物进行纯化后直接测序，判定基因分型。　　 结果：未发现XRCC1194不同基因型对铂类化疗敏感性有差异，携带XRCC1399Arg/Arg的化疗有效率是Gln/Gln的2.5倍(P=0.035，CI=0.892-7.094)。携带一个Gln等位基因的化疗失败风险是携带Arg/Arg的1.7倍(P=0.044，CI=1.012-2.720)。未显示XRCC1194，399两个位点的联合作用与铂类敏感性之间具有相关性。　　 4药物基因组学在临床肿瘤化疗个体化治疗中的应用　　 除了建立了NSCLC药物基因多态性的研究方法以外，我们还建立了胸苷酸合成酶(TS)3’端的6 bp插入/缺失的多态性研究，以及二氢嘧啶脱氢酶(DPD*9，T/C)的多态性研究方法。TS基因是5-氟尿嘧啶(5-FU)的体内作用靶点，TS基因在3’端的6 bp缺失多态，可影响TS酶的表达，从而增强5-FU的疗效，而DPD是5-FU的体内主要代谢酶，DPD*9多态性会降低DPD酶活性，减弱其对5-FU的灭活，加重胃肠道反应。　　 另外，基于EGFR靶向治疗，我们建立了吉非替尼、厄洛替尼的疗效预测因子EGFR19、21外显子的多态性研究以及西妥昔单抗的疗效预测因子KRAS12、13密码子的多态性研究方法。EGFR19、21外显子野生型患者接受吉非替尼、厄洛替尼的失败风险远高于突变型患者，而只有KRAS野生型患者才能从西妥昔单抗的治疗中获益，突变型则不能获益。　　 到目前为止，我们已完成了25例临床肿瘤基因多态性检测服务，其中有肺癌5例、结直肠癌7例、食管癌2例、胰腺癌1例，乳腺癌6例，膀胱癌1例，胃癌3例，涉及的药物包括铂类、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、伊立替康、吉非替尼、西妥昔单抗等。里面不乏有一些较为成功的病例，但是也有一些在检测结果显示敏感的情况产生了耐药或者出现了较为严重的毒副反应。　　 因此，在运用药物基因组学指导制定肿瘤个体化治疗方案的同时，要对肿瘤的恶性程度和疾病的进展情况进行综合考虑，同时，也可能存在着一些未知的耐药基因以及在接受化疗的过程中新生的基因突变，均可能导致耐药的出现。　　 5结论：　　 药物基因组学是一门介于遗传学、分子生物学以及临床药物治疗学之间的新兴学科，运用药物基因组学来制定临床用药方案是对目前临床治疗的一种挑战，它打破了以往经验疗法的治疗模式，建立了以个体基因多态性为依据，实行“量体裁衣”式的个体化用药方案。尤其是在恶性肿瘤的治疗中，伴随着肿瘤的恶性程度及进展速度，仅仅依靠经验疗法显然无法满足个体化的需求，运用药物基因组学，对提高临床合理用药，改进肿瘤治疗模式具有十分重要的意义。