论文部分内容阅读
阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是发生在老年前期及老年期、以进行性认知功能障碍和行为损伤为特征的中枢神经退行性疾病,主要表现为进行性认知功能障碍和记忆力减退。其病理特征为细胞外出现老年斑（senile plaque,SP）和神经纤维缠结（Neurofibrillary tangle,NF）,但AD病因尚不清楚且发病机制复杂,临床缺乏能够减少神经元死亡和延缓疾病进程的药物。大量临床和流行病学证据表明女性与男性相比有较高的发病率,表明女性更年期雌激素水平下降可能诱发AD。研究表明雌激素有提高神经元活力和减少Aβ聚集的作用,故雌激素可用于AD的预防或是治疗,但绝经后妇女的临床试验数据显示雌激素疗法存在不良反应,使其在临床治疗中的应用具有局限性。研究发现采用与雌激素化学结构类似的植物雌激素用于神经退行性相关疾病的治疗时,植物雌激素不仅具有雌激素样神经保护作用同时可以降低不良反应的发生,因此有望成为预防和治疗AD的药物。槲皮素（Quercetin,Que）作为一种黄酮类天然化合物,是一种化学结构和雌激素相似的植物雌激素,可以从多种天然植物或食物中提取,无明显毒性和不良反应。本课题组的前期研究证实槲皮素可以通过结合雌激素α受体表现出雌激素样作用,促进人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖;对大鼠海马和皮层的神经元具有保护作用,提高了神经元突触的数目及长度,促进突触的生长及发生,从而改善神经元细胞的生长率和存活率。本研究采用老化的Aβ25-35处理PC12细胞构建AD体外模型,探讨槲皮素类雌激素样神经保护作用及相关机制,为阿尔茨海默病的药物治疗提供思路和策略。实验中老化的Aβ25-35与PC12细胞共孵育24小时后分别加入阳性对照药物17β-雌二醇0.1μmol·L-1、金雀异黄素50μmol·L-1和三个不同浓度的槲皮素（200、300、400μmol·L-1）进行药物干预24小时。通过MTT实验检测槲皮素对大鼠PC12细胞Aβ25-35损伤模型活性的影响,通过细胞免疫荧光染色法和蛋白质免疫印迹法检测细胞模型中雌激素受体α（Estrogen receptorα,ERα）和雌激素受体β（Estrogen receptorβ,ERβ）、细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated,p-ERK1/2）、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达量的变化。并使用工具药雌激素受体拮抗剂ICI182,780和MAPKK抑制剂U0126探索槲皮素在AD细胞损伤模型中发挥雌激素样神经保护作用的机制。实验结果显示,随着Aβ25-35作用浓度的增加,细胞活力所受抑制程度逐渐加强,与对照组相比Aβ25-3510μmol·L-1作用细胞24h后能够显著降低细胞存活率（P﹤0.01）。MTT法检测细胞活力结果表明,与模型组相比,17β-雌二醇、金雀异黄素和三个不同浓度的槲皮素组的细胞存活率均显著增强（P﹤0.05）。免疫荧光法和蛋白印迹法结果显示,与模型组相比,槲皮素提高ERα和p-ERK1/2蛋白表达量（P﹤0.05）,对于ERβ蛋白表达量虽有增加但无显著性差异（P>0.05）。并且在Western blot实验中实验组凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达比值增加及Caspase-3蛋白表达下降（P﹤0.05）。当槲皮素雌激素受体受到ICI182,780抑制后,p-ERK1/2蛋白表达下降（P﹤0.05）,Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表达增加（P﹤0.05）。当U0126作用于槲皮素后,Bcl-2/Bax比值下降及Caspase-3蛋白表达增加（P﹤0.05）。槲皮素对Aβ25-35导致的PC12细胞损伤的AD模型具有保护作用,其雌激素样神经保护作用通过经典的雌激素受体通路及MAPK途径减弱凋亡发生,并且ERα还可以介导槲皮素激活MAPK信号通路。