背景与目的:肺癌是危害人类身体健康的常见恶性肿瘤之一。针对表皮生长因子的靶向治疗是目前肺部肿瘤治疗领域的主要热点之一,其具有疗效稳定、效果显著、副作用小等特点,在临床中得到了广泛的应用及好评,但与此同时,绝大多数的肺癌患者会在用药后的1年时间里出现不同程度的病情复发或者肿瘤转移,导致这一结果最主要的原因是患者的肿瘤细胞对EGFR-TKIs药物产生了获得性耐药。因此,研究EGFR-TKIs获得性耐药的机制及逆转EGFR-TKIs耐药是目前研究的主要热点。随着分子生物学的发展,研究人员发现肿瘤组织中除会出现特定基因位点突变及异常信号通路激活外,还会出现一些特殊的表观遗传性状的改变。EZH2是一个重要的表观遗传调控基因,是PRC2复合物的核心成员,具有组蛋白甲基转移酶(Histone methyltransferase,HMT)活性,能够对组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基(H3K27me3)进行催化从而抑制靶基因的表达。研究者发现EZH2在肺癌中高表达且其表达量与预后相关,与此同时EZH2抑制剂也被发现能够提升肿瘤细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性。本研究有三个主要目的:(1)探讨EZH2在非小细胞肺癌中的表达情况及表达差异与预后的关系。(2)EZH2抑制剂与吉非替尼联合应用,对耐吉非替尼的肺癌细胞生物学行为的影响。(3)在EGFR野生型非小细胞肺癌中,是否能够通过应用EZH2抑制剂从而逆转其对吉非替尼的耐药性。方法:借助TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库分析,对肺鳞癌和肺腺癌的癌组织及癌旁组织中EZH2表达量进行了对比,进一步研究EZH2表达与患者预后的相关性。随后应用qRT-PCR技术对40例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁正常组织的EZH2的表达情况进行了检测,应用Western blot检测不同非小细胞肺癌系(H460,A549,HCC827,H1299,H1650,H1792,H1975,H2030)及正常肺泡上皮细胞系(B2B)EZH2的表达情况。为了进一步研究EZH2抑制剂与吉非替尼的联合作用效果,我们以PC-9/AB2细胞为耐药细胞模型,应用CCK-8、EdU实验检测联合用药对于细胞活性及增殖的影响;通过划痕及transwell小室实验观察联合用药对于细胞迁移能力的影响;并应用流式细胞学技术检测联合用药对于细胞凋亡的影响;并通过Western blot观察联合用药对EGFR信号通路的作用。以A549、H1299细胞为EGFR野生型细胞模型,应用EZH2siRNA进一步敲低细胞中EZH2的表达,检测敲低EZH2后细胞对吉非替尼的敏感性变化,同时应用CCK-8及EdU实验检测联合用药对于细胞活性及增殖的影响;通过划痕及transwell小室检测联合用药对于细胞迁移能力的影响;并应用流式细胞学技术检测联合用药对于细胞凋亡的影响;并通过Western blot观察联合用药对EGFR信号通路及其下游信号通路的影响情况。结果:TCGA分析结果显示EZH2在非小细胞肺癌组织(肺鳞癌及肺腺癌)中的表达水平显著高于癌旁正常组织,同时其表达水平的与肺腺癌的患者的预后呈现负相关性;qRT-PCR结果显示:在40例临床的非小细胞肺癌患者的肿瘤样本中EZH2的表达水平显著高于癌旁正常组织,细胞实验结果显示在非小细胞肺癌株(A549,H460,HCC827,H1299,H1650,H1792,H1975,H2030)中EZH2的表达量明显高于正常的肺泡上皮细胞株B2B细胞。在吉非替尼获得性耐药的PC9/AB2细胞中,联合应用EZH2抑制剂(GSK343)与吉非替尼,能够显著的抑制细胞的活性,并且抑制细胞的迁移,诱发细胞的凋亡,Western blot的结果也显示,联合用药也能够显著抑制EZH2表达及EGFR蛋白的磷酸化。而在EGFR野生型细胞中,我们发现应用siRNA敲低A549、H1299的EZH2基因后,其对吉非替尼更加敏感;联合应用EZH2抑制剂(GSK343/DZNep)+吉非替尼也能够显著抑制A549及H1299细胞的增殖能力和迁移能力,同时诱导细胞凋亡;Western blot的结果也显示:敲低EZH2后再应用吉非替尼,细胞的EGFR及P-EGFR表达水平明显较未敲低组明显降低,与此同时联合应用EZH2抑制剂与吉非替尼能够显著的抑制EGFR蛋白及P-EGFR蛋白的表达。