结核病(tuberculosis/TB)是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,根据世界卫生组织(WHO)2015年全球结核病报告显示,全球约有1/3的人携带结核分枝杆菌,其可以长期潜伏在宿主体内,需要持续的药物治疗,进而导致结核分枝杆菌多耐药菌株、泛耐药菌株日趋增多,这为结核病的防治带来了巨大的威胁和挑战。因此,加强对结核分枝杆菌的基础研究,特别是其致病性的研究,对于抗结核药物的研发及结核病的诊断和治疗显得尤为重要。CRISPR-Cas系统是原核生物的一种依赖于核酸的获得性免疫系统,其不但能帮助宿主抵御外源基因入侵,还能影响病原菌毒力。结核分枝杆菌中的CRISPR-Cas系统属于Ⅲ-A亚型,该系统主要用于结核分枝杆菌分型,然而其在结核分枝杆菌内的生物学功能至今未有报道。在本实验中,我们主要研究了结核分枝杆菌CRISPR-Cas系统中的Csm3蛋白,制备了抗Csm3的多克隆抗体,研究结果表明Csm3为分泌蛋白,能够帮助细菌抵抗巨噬细胞吞噬,从而提高细菌毒力。另外,我们还发现Csm3蛋白不能引起巨噬细胞凋亡,但是能够引起较弱的T细胞反应。以上结果说明结核分枝杆菌的CRISPR-Cas系统不但能帮助细菌抵御外源基因入侵,还与细菌毒力及宿主免疫相关。同时,我们在体外纯化了 Cas蛋白及HtpG蛋白,通过Co-IP和GST Pull-down实验鉴定了复合物中与Csm3相互作用的蛋白,初步解析蛋白组分间的关系,并进一步研究了 Csm3与crRNA的关系,使我们更加深入了解了CRISPR-Cas系统。另外,我们在体外纯化了 crRNA-Csm复合物,遗憾的是由于其纯度不够高,无法进行后续实验,故接下来还需要进一步的纯化验证。