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第一部分合肥地区淋球菌抗菌药物耐药情况分析目的:抗菌药物对合肥地区淋球菌的抗菌药物耐药性进行检测,并研究2014到2015年间本区域淋球菌的耐药现状。方法:对2014到2015年间就诊于合肥省立医院性病门诊就诊的有急性尿道炎症状的患者进行淋球菌分离培养。使用琼脂稀释法测定大观霉素、阿奇霉素、头孢曲松、头孢克肟、青霉素、环丙沙星及四环素对全部126株淋球菌的最小抑菌浓度(MIC)。对于四环素高度耐药淋球菌(TRNG)和产青霉素酶淋球菌(PPNG),使用多重聚合酶链反应法(PCR)分型其耐药质粒。结果:本研究中淋球菌对抗菌药物耐药率依次为:阿奇霉素28.6%(36/126),其中高度耐药菌株比例为10.3%(13/126)、青霉素73.8%(93/126)、环丙沙星100%(126/126)、四环素81.7%(103/126)。头孢曲松低敏菌株比例为10.3%(13/126),头孢克肟低敏菌株比例为3.2%(4/126)。在所有的菌株中,不存在头孢曲松、头孢克肟以及大观霉素的淋球菌耐药菌株。但PPNG占总菌株的39.7%(50/126),TRNG比例为31.7%(40/126)。PPNG主要携带亚洲型质粒(80%,40/50),非洲型质粒比例(20%,10/50),未发现多伦多型。TRNG的主要质粒型别为荷兰型(97.5%,39/40)。结论:阿奇霉素耐药菌株大比例出现,呈上升趋势的大观霉素MIC及头孢曲松低敏菌株数量,都预示着合肥地区淋球菌耐药的严峻处境。针对这种情况,加强监测其耐药性趋势和研究淋球菌耐药性原理变得更加迫切。目前合肥地区的一线用药依然可以选择大观霉素和头孢曲松。另外研究发现,合肥地区淋球菌质粒介导的耐药比例和TRNG质粒型别分布与南京等中国东南部地区相似。第二部分耐阿奇霉素及头孢低敏淋球菌的耐药机制和分子流行病学研究目的:了解合肥地区阿奇霉素耐药及头孢类抗菌药物低敏淋球菌菌株的基因型别、耐药相关基因突变情况及菌株间的进化关系。方法:1.对全部126株淋球菌菌株进行耐药相关基因mtrR检测,并比较耐药基因突变在阿奇霉素敏感组(MIC<1 mg/L)和耐药组(MIC≥1mg/L)间的差异。以淋球菌多抗原序列分型(NG-MAST)方法确立菌株的序列型(ST),并构建系统进化树。2.对36株阿奇霉素耐药淋球菌菌株及5株敏感菌株进行23SrRNA的检测,比较阿奇霉素耐药菌株耐药基因突变在中度耐药组(MIC 1~64 mg/L)和高度耐药组(MIC≥256 mg/L)间的差异。3.对14株头孢曲松和/或头孢克肟低敏的淋球菌菌株进行Pen A检测。结果:126株菌株中,mtrR序列前区A的缺失出现在107株菌株中,耐药菌株中有33株(33/36;91.7%),敏感菌株中有74株(74/90;82.2%),两者之间差异无显著性(p=0.181)。而突变点G45D出现在25株耐药菌株中(25/36,69.4%),9株敏感菌株中(9/90,10%),两者间差异有显著性(p<0.01)。A40D的突变出现在三株头孢低敏的菌株中,A39T突变出现在16株阿奇敏感菌株中。23Sr RNA基因4个等位基因的A2143G突变均出现在阿奇霉素高度耐药(MICs≥256 mg/L)菌株中,4个等位基因的C2599T突变出现在MIC=8-32 mg/L的四株菌株中,5株敏感菌株中均未发生突变。该实验未发现广谱头孢菌素耐药菌株,但其中有13株菌株对头孢曲松低敏(MIC=0.125 mg/L),4株对头孢克肟敏感性均降低(MIC=0.25 mg/L)。14株头孢低敏菌株中共检测出了6种不同氨基酸序列的PBP2,其中包含一个镶嵌状结构(XXXV,n=3)。11个非镶嵌状结构中,7株PBP2型别为XIII,XVII,XXI的菌株中出现了A501V的突变,3株(PBP2,XVIII)发生A501T突变,1株发生了G542S突变。126株菌株共鉴定出86个不同的STs,其中53个为新发现的STs,ST7469为最常见的菌株类型为6株,其次是ST1866为5株,且ST1866均为阿奇霉素耐药菌株。经系统进化树分析未发现阿奇霉素耐药与头孢低敏菌株同源进化现象。结论:mtrR编码区G45D替换突变可能参与阿奇霉素高度耐药。23Sr RNA中A2143G和C2599T突变分别与阿奇霉素高度和中度耐药相关,ST1866是本地区与阿奇霉素高度耐药相关的优势基因型。镶嵌状pen A突变模式可能在介导本地区淋球菌对头孢克肟低敏中发挥重要作用,特定的非镶嵌状pen A突变模式(尤其是PBP2氨基酸A501位点突变)可能在介导本地区淋球菌对头孢曲松低敏中起着重要作用。合肥地区淋球菌菌株遗传背景具有多样性。