【摘 要】
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柑橘（Citrus reticulata Blanco）为芸香科（Rutaceae）,柑橘亚科（Aurantinoideae）常绿小乔木或灌木,性喜温,易受低温冻害影响,陕南地区是我国柑橘种植的最北缘地区,更易受到周期性冻害影响。本研究以蜜橘（Miju）、不知火（Shiranui）和金橘（Kumquat）3种柑橘幼苗为试材,研究2℃低温处理72h后,柑橘幼苗叶片的形态变化,检测相关生理指标,利用主
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柑橘（Citrus reticulata Blanco）为芸香科（Rutaceae）,柑橘亚科（Aurantinoideae）常绿小乔木或灌木,性喜温,易受低温冻害影响,陕南地区是我国柑橘种植的最北缘地区,更易受到周期性冻害影响。本研究以蜜橘（Miju）、不知火（Shiranui）和金橘（Kumquat）3种柑橘幼苗为试材,研究2℃低温处理72h后,柑橘幼苗叶片的形态变化,检测相关生理指标,利用主成分分析法对3种柑橘幼苗的抗寒性进行综合评价。通过双向电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离-飞行时间（MALDI-TOF/TOF）质谱技术,研究2℃低温胁迫后柑橘幼苗叶片的蛋白质表达情况。同时,对1991年以来的陕南地区柑橘的周期性冻害进行了调查,研究了冻害发生规律,并提出了相应的冻害防治措施。主要研究结果如下:1.2℃低温处理后,3种柑橘幼苗叶片均有不同程度的卷曲,蜜橘卷曲程度最大,不知火其次,金橘卷曲程度较小或无卷曲;超氧阴离子(O2-.)组织化学定位表明,胁迫后蜜橘O2-.累积增加,不知火和金橘的累积无明显变化;细胞膜系统相关生理指标相对电导率（relative electric conductivity,REC）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量均呈上升趋势,其中蜜橘的REC和MDA含量上升幅度最大,表明低温下蜜橘幼苗的细胞膜系统受到损伤严重;渗透调节物质脯氨酸（Proline,Pro）和可溶性糖含量均增加,金橘的Pro和可溶性糖含量增加最大,表明低温胁迫下金橘的渗透调节物质对低温产生积极的响应。主成分分析结果表明,MDA与3种幼苗的抗寒性相关系数最大,可以用来作为比较柑橘幼苗抗寒性的重要指标,同时比较3种柑橘的抗寒性大小为:金橘>不知火>蜜橘。2.通过对Tris-HCl缓冲液提取法和三氯乙酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀法比较发现,TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白量多,更适合做双向电泳蛋白质的样品制备方法。利用2-DE电泳对不知火和金橘的蛋白进行分离,从不知火蛋白图谱中共获得了194个蛋白点,匹配了94个蛋白,其中有35个蛋白表达差异显著,5个蛋白表达上调,30个蛋白表达下调;金橘电泳图谱中,共获得了168个蛋白点,匹配了77个蛋白,其中14个蛋白表达差异显著,7个蛋白点表达上调,7个蛋白点表达下条。对8个蛋白点MALDI-TOF/TOF质谱鉴定结果表明,分子伴侣蛋白、光合作用相关蛋白、氮代谢和信号转导等相关蛋白参与了柑橘幼苗对低温的响应应答。3.陕南柑橘的周期性冻害调查结果显示,从1991年至2016年共有6次大的冻害,近年冻害周期缩短。坡地上的柑橘冻害较轻,平地和沟底的柑橘冻害较为严重;老树的抗冻能力明显强于幼树;栽培管理好、营养供给及时的冻害比较轻。同时,高位嫁接可以有效减少冻害。
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