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牙齿萌出、乳恒牙替换是儿童口腔中的正常生理现象，其中萌出途径的形成以及乳牙根的吸收，是牙齿正常萌出和替换的先决条件，在这些过程中破骨细胞（OC）起着重要作用。因此研究破骨细胞的激活、分化等生物学特性对了解和调控乳恒牙的萌出有重要意义。 破骨细胞是骨组织中参与骨吸收的多核巨细胞，来源于骨髓及脾脏中的造血干细胞。研究发现很多细胞因子，如1,25（OH）2D3、IL、M-CSF、PTH、PGE2等对破骨细胞的形成有诱导作用，但目前的各种报道表明破骨细胞的体外培养难度大，且获得细胞的纯度很低，一般不超过10％，这就给进一步研究破骨细胞的生物学特性带来困难，因此寻找一种较好的诱导方法具有重要意义。关于各种诱导因子作用强弱的比较，目前国内尚未见报道，国外在这方面的研究也不多；而复合因子对破骨细胞体外形成的影响，国内外均未见到文献报道。 近年来，人们发现在破骨细胞表面有整合素受体表达，并参与破骨细胞的迁移与分化，介导细胞与骨基质的粘附以及细胞内外的信息传递，其表达水平与破骨细胞功能有密切关系。在破骨细胞膜上鉴定出来的整合素主要有αVβ3、αVβ1、α5β1、α2β1等，其中αVβ3在破骨细胞的表达水平最强，是破骨细胞的主要粘附分子，但对破骨细胞不同的培养时期整合素的表达水平未见报道。 乳恒牙替换过程中，恒牙萌出的压力使受压组织首先转化为肉芽组织，然 第四军医大学硕土学位论文后分化出破骨细胞，最终导致了乳牙根的吸收。但压力对破骨细胞分化的影响，是机械刺激直接引起细胞分化，还是压力作用于其它细胞，分泌细胞因子，促进破骨细胞分化，目前有关这方面的研究仅见到 McAllister（2000年）的一篇报道，他们采用流体液压方法对破骨细胞单核前体细胞施加外力，可促使其自分泌前列腺素，进而促进破骨细胞的分化。为此，本研究完成了以下4个实验： 实验1为单因子对体外培养大鼠破骨细胞的诱导作用。采用大鼠脾细胞和成骨细胞联合培养，即将上述两种细胞悬液加入培养板中共同培养。实验分6组，实验组分别加入l，25（OH）2D3、PTH、PGEZ、IL－ie、M－CSF，对照组不加诱导因子，各组用含10％胎牛血清的a－MEM培养液，于37OC、5％CO卜饱和湿度下培养。并采用倒置显微镜观察细胞形态，1’’’－x－染色及扫描电镜观察牙本质片吸收陷窝等破骨细胞鉴定方法，对5种诱导因子的作用强弱进行了比较，结果表明： 多核细胞在体外培养后第sd开始出现，第sd达到高峰，以后逐渐减少，至第 14d基本消失；5种诱导因子对破骨细胞的体外形成均有诱导作用，其中以1，25（＊H）。q的作用最强…＜0刀1人其它诱导因子间无显著性差异。 实验2为双因子对体外培养大鼠破骨细胞的诱导作用。细胞培养和鉴定方法同实验 1，实验分 6组，实验组分别加入 l，25(OH＼ZD广 M(SF、l，25（OH）2D3＋PTH、1，25（OH）2D3＋PGEZ、l，25（OH）2D3＋IL－lp，并设 1，25（OH）刃。单因子对照组和空白对照组，观察双因子对破骨细胞的诱导作用，并与单因子进行比较，结果表明： 破骨细胞的生长状况同实验卜 双因子的诱导作用强于单因子，其中1，25（ OH） 2D3十M一CSF、1，25（OH）2D3＋P＊的效果最好，尤以前者更明显，细胞纯度可达20％。 实验3为体外培养大鼠破骨细胞整合素Q小。的表达及意义。采用骨髓腔冲洗法，a－MEM培养液冲洗大鼠长股骨髓腔，将冲洗液过滤后接种于培养板 3 第四军医大学硕士学位论文中。实验分两组，实验组加入l，25（OH）2D3＋M－CSF，对照组不加药，倒置显微镜下观察细胞生长及分化情况。细胞接种后第Zd开始，采用原位杂交技术检测各组细胞中整合素ave。InRNA的表达，观察不同培养时期破骨细胞中整合素Qvp3mRNA的表达，并用TRAP染色作对照，结果表明： 在培养后第3d的破骨细胞单核前体细胞中即有整合素avP。mRNA的表达，第sd才出现多核细胞及TRAP的阳性染色，说明原位杂交检测破骨细胞整合素Qv日3的方法优于形态学观察法和TRAP染色法，故整合素Qv日3的原位杂交检测可作为鉴定破骨细胞的一种敏感性高的新检测方法；培养后第sd，整合素 Qve3InRNA的表达达到最大值，此时破骨细胞的数量也最多，说明整合素与破骨细胞的分化和骨吸收的功能密切相关。 实验4为压力对体外培养大鼠破骨细胞的影响。本试验采用可控压力加载装置对脾细胞单独培养的单核细胞施加间断性压力，实验分6组，每组一个培养板，实验组每日分别置于加压装置中2次，每次lh，加力间隔时间为sh，所力压力 A组为 50Kpa，B组为 70Kpa，C组为 100Kpa，D组为 120Kpa，E组为 150Kpa，F组不加压为对照组。细胞于培养第 Zd开始加压，培养 2周，观察其对体外培养破骨细胞分化的影响，并用形态学观察及整合素Qv日3的检测等方法了解细胞生长状况，结果表明： 大小适