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目的:观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对体外培养的大鼠海马神经干细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。 方法:采用原代培养的新生大鼠海马神经干细胞,并测定其增殖。于第3天分别给予不同浓度的ICA(50、100、200μM)孵育12 h后,使用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记分裂增殖的细胞,于第7天收集细胞待测。首先,采用免疫荧光法检测神经干细胞巢蛋白(Nestin)的表达;BrdU免疫荧光法检测神经干细胞的增殖能力;形态学和分子生物学手段检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞;其次,细胞计数仪检测神经干细胞的数目;BrdU免疫荧光检测ICA对神经干细胞的增殖情况;最后,实时定量聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)检测细胞周期基因Cyclin D1和p21 mRNA的表达;Western Blot检测Cyclin D1蛋白的表达。 结果:1.神经干细胞的鉴定:(1)形态学观察:体外培养的海马神经干细胞悬浮聚集生长,呈不规则的圆形或桑葚状细胞集落,球体透亮,边缘清晰、有荆棘状突起,立体感强;(2)神经干细胞巢蛋白(Nestin)表达阳性;(3)神经干细胞增殖能力(BrdU)表达阳性;(4)神经干细胞分化能力:神经元(NSE)表达阳性和星型胶质细胞(GFAP)表达阳性;2.ICA明显增加神经干细胞的个数;3.ICA促进神经干细胞内BrdU阳性的表达;4.ICA明显增高神经干细胞Cyclin D1和p21 mRNA的表达;5.ICA明显增高神经干细胞Cyclin D1蛋白的表达。 结论:ICA可以促进神经干细胞的增殖。