产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及其功能性发酵酸奶的研制

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本文从传统的发酵食品中分离筛选出产γ-氨基丁酸(GABA)的乳酸菌菌种,利用薄层色谱和高效液相色谱法分别对其产GABA的能力进行定性和定量分析,对GABA合成能力较高的乳酸菌进行形态学特征、生理生化实验和16S rDNA基因鉴定,确定其种属,然后将高产GABA的乳酸菌与传统的酸奶发酵菌株联合发酵制备发酵酸奶,研究所得产品的品质情况,开发出富含GABA的新型发酵酸奶制品。结论如下:(1)采用高效液相色谱邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生-紫外检测法对乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸含量的测定进行了研究。乳酸菌发酵液经离心、OPA柱前衍生后,利用Luna-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm),以15mmol/L醋酸钠缓冲液:甲醇=55:45为流动相,在流速为0.8mL/min,柱温30℃,紫外检测波长334nm的条件下进行测定。结果表明:γ-氨基丁酸在50μg/mL~800μg/mL的浓度范围内线性关系良好,线性方程为y=5465.9x–5411(R2=0.9996),检测限为2.6714μg/mL,平均回收率为98.31%,RSD=2.27%。该方法操作简便,快速,分离度好,精密度高,符合痕量分析要求,能够满足乳酸菌发酵液中γ-氨基丁酸含量的检测。(2)从传统乳制品中分离出22株乳酸菌,采用薄层色谱法和高效液相色谱法对22株乳酸菌进行了合成γ-氨基丁酸能力分析。薄层色谱结果显示,在含有质量浓度为10g/L的谷氨酸钠的MRS液体培养基中37℃培养48h后,有14株具有生成γ-氨基丁酸的能力;经过高效液相色谱法定量分析,获得2株产量较高的菌株QL-14(0.39g/L)和QL-20(0.584g/L)。经形态学特征、生理生化实验和16S rDNA基因鉴定,确定菌株QL-14和QL-20分别为植物乳酸菌(Lactobacillus plantarum)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。(3)将筛选得到的产GABA乳酸菌与传统的酸奶发酵菌株联合发酵用于富含GABA功能性酸奶的研制,并对其品质进行了考察。经实验结果显示,在添加谷氨酸钠为0.5%的脱脂乳培养基中,温度37℃,经时间6h发酵后,干酪乳杆菌QL-20能与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌(1:2:1,接种量5%)联合发酵制备酸奶,酸奶酸度为98.3°T,pH为4.38,乳酸菌数为3.5×107CFU/mL,GABA含量为0.2242g/L,口感较好,符合国家标准。
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