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目的本课题是在863课题“基于海洋传统药源生物的中药新药开发”支持下测定牡蛎素的理化成分,研究牡蛎素对小鼠免疫功能的影响、急性毒性作用,为海洋中药大连湾牡蛎素的成药性评价提供药学、药效学及安全性方面的数据。方法牡蛎素的理化成分测定:凝胶电泳分析测定牡蛎素中多肽的分子量,LC-MS/MS法测定牡蛎素中主肽成分MLS-1及其他肽的氨基酸全序列,分光光度法测定牡蛎素中的多肽含量,氨基酸自动分析仪外标法测定牡蛎素中氨基酸的组成及含量。牡蛎素对小鼠的免疫调控作用:ICR小鼠按其体重随机分为对照组,贞芪扶正颗粒(阳性药)组(3.9 g/kg)和牡蛎素0.0625 g/kg、0.125 g/kg、0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg剂量组(其中碳廓清实验中无牡蛎素0.0625 g/kg、0.125 g/kg剂量组)。贞芪扶正颗粒组和牡蛎素各给药组小鼠每天按相应剂量灌胃0.2 ml/只,对照组小鼠每天灌胃蒸馏水0.2 ml/只,15 d后测定每组小鼠的各项免疫指标,即碳廓清实验检测小鼠巨噬细胞吞噬功能、MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应、溶血空斑实验检测小鼠抗体生成细胞(B淋巴细胞)生成的能力,并计算各组小鼠相应的免疫器官指数。急性毒性实验:40只ICR小鼠,雌、雄各半,按其体重随机分为对照组、牡蛎素组,各组雌、雄参半。采用最大耐受量法(MTD法),对小鼠进行16 h的禁食,第二天牡蛎素组每只小鼠经灌胃给予浓度为0.5412 g/ml、体积为0.8 ml的牡蛎素,一日2次,2次给药间隔6 h,累计给药量43.3 g/kg,正常对照组每只小鼠给予0.8 ml三蒸水,一日2次,2次给药间隔6 h。给药后的14 d中,对小鼠的一般行为表现、中毒情况和死亡状况等进行观察记录;14 d后处死、解剖全部小鼠,肉眼察看小鼠的主要组织器官变化。结果牡蛎素的理化成分测定:牡蛎素中多肽的分子量为2～10 k D。牡蛎素中的主成分肽为MLS-1,其一级序列为MLAILDQYSK;其他肽的一级序列为:VIKFSDLPDP;SSTWEVQSLV;GEGTYGEIHK;AIHKESGEVV;AMKVLDSIHE;KIEEIEEEYR;VLHDLGNHPN;MPRFHGIYLK;PPTTGMDAE;WIAMELCGRG;SVTHLVRELI;GRGEALEEDL;IAHIIRETLK;ALQHLHKNHV;IHRDVKGHNI;LINDQGQIKL;IDFGVSGHLA;STLARKNTSV;GTPYWMAPEV;IACERQVEYN;YDIRCDIWSL;GITAIELADG;EPPLSDLHPM;RALFKIPRNP;QPQFANPDRW;SEDFKDFIAK;CLIKDFEVRP;FTHDLLRHPF;IAKLPDDTSQ;VNYLTGQDGS;NNTIFLSNI。牡蛎素中多肽的含量为:89.72%。牡蛎素中含有天冬氨酸(Asp)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、甲硫氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、色氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)等16种氨基酸,其中Asp、Glu、Lys以及Arg为主量氨基酸。牡蛎素对小鼠的免疫调控作用:与对照组比较,牡蛎素0.25 g/kg、0.5 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg剂量组小鼠的巨噬细胞吞噬功能显著增强(23.31%、27.75%、31.79%、27.75%)、小鼠抗体生成细胞生成的能力明显提高(17.71%、20.42%、18.50%、18.09%);牡蛎素0.0625 g/kg、0.125 g/kg、0.25 g/kg、0.5 g/kg剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖能力显著提高(53.66%、120.73%、132.93%、123.17%);牡蛎素各剂量组小鼠脾脏指数、胸腺指数无显著增加(P>0.05)。急性毒性实验:小鼠对牡蛎素的MTD大于43.3 g/kg;和对照组比较,牡蛎素组中的小鼠给药2次后,均未见异常变化;给药之后的14 d当中,小鼠全部存活,其行为表现、体位姿态、进食、喝水、毛发、排泄等均未见异常;牡蛎素组中小鼠的体重、摄食量和对照组相比,差别都没有统计学差异;第14 d处死、解剖全部小鼠,肉眼未见各组织器官有异常改变。结论牡蛎素中含有分子量为2～10 k D、含量为89.72%的多肽,并通过增强小鼠的非特异性免疫和特异性免疫(细胞免疫、体液免疫)来增强机体的免疫功能。小鼠对牡蛎素的MTD大于43.3 g/kg(相当于成人所用剂量4.7582 g/kg),按照2003版《保健食品检验与评价技术规范》附录D急性毒性剂量分级表的规定,牡蛎素属于无毒级别。