【摘 要】
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目的：NO是人体内一个重要的生物小分子,同时也是一种稳定的生物自由基,本研究以NO为研究对象,首次用简易的方法制得的NO饱和水溶液用于体外DNA实验,探索NO保护·OH诱导的DNA氧
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目的：NO是人体内一个重要的生物小分子,同时也是一种稳定的生物自由基,本研究以NO为研究对象,首次用简易的方法制得的NO饱和水溶液用于体外DNA实验,探索NO保护·OH诱导的DNA氧化损伤的活性,并研究其保护DNA氧化损伤的作用机制。方法：制备NO饱和水溶液：用排水法收集NO(g)后,加入已脱气的蒸馏水制得NO饱和水溶液。NO保护·OH诱导的DNA氧化损伤活性的研究：紫外分光光度法分析NO对·OH所致DNA损伤的修复作用,高效液相色谱法检测NO保护·0H诱导的5种碱基的氧化损伤,NO对·OH所致小鼠HT-22细胞氧化损伤的保护作用。NO保护·OH诱导的DNA氧化损伤活性的机制研究：用重氮化偶合分光光度法检测反应液中亚硝酸的存在,以及检测NO清除DPPH·自由基和Fe3+还原能力的实验,探讨可能的机制。结果：NO对于·OH诱导的DNA体外氧化损伤有明显的保护作用,呈现出一定的量效关系,IC50值为0.19±0.01mmol/L。通过对比谱图分析得出加入NO后对五种碱基氧化损伤具有非常有效的保护作用。NO对·OH诱导的腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶损伤保护的IC50值分别为0.89±0.013、1.12±0.043、1.21±0.32、1.22±0.036、1.13±0.021mmol/L。细胞实验中,NO可以减少·OH所致的小鼠HT-22细胞的氧化损伤,提高细胞活力。紫外分光光度法检测出NO和·OH的作用产物中确实存在HNO,2,通过重氮化偶合分光光度法测得的标准曲线的回归方程(Y=0.4843X+0.0246,R=0.99914)可算出其浓度为0.19mmol/L。NO清除DPPH·自由基和Fe3+—还原的IC.50值分别为27.74±0.50、313.50±0.05μ mol/L。结论：NO能清除自由基、具有还原能力,可以作为一种抗氧化剂保护DNA减少被·OH诱导损伤。NO对DNA的保护作用主要是通过其与·OH作用时,部分供电子(e)生成HNO2。
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