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目的钼(Mo)广泛存在于自然界中,同时又是动物机体正常生命活动所必须的微量元素。而过多的摄入钼,则会导致组织损伤及功能改变。本研究通过将雌性小鼠暴露于不同钼浓度下来构建生殖损伤模型,观察钼对卵巢组织及卵细胞的影响,阐明维生素C、E对钼暴露小鼠生殖功能损伤保护作用的机制,为治疗钼暴露小鼠引起的生殖功能损伤提供参考依据。方法1.钼对小鼠附植前胚胎体外发育的影响:受精卵由性成熟的昆明雌鼠获得,然后分别在钼浓度为0、5、10、20、40、80、120、160μg/mL的8个KSOM液中培养5d直到发育至囊胚中期。在倒置显微镜下观察胚胎的发育情况。最后将各组发育至囊胚的胚胎分别移植到不同的假孕小鼠体内,记录小鼠出生率。2.钼对小鼠卵巢功能的影响:将ICR株成年雌性小鼠分为5组,分别通过饮水进行钼暴露,饮水中钼浓度为0、5、10、20、40μg/mL。14d后,获取小鼠的MⅡ期卵母细胞和卵巢组织,以MⅡ期卵母细胞的总数和畸形率,卵巢指数,卵巢超微结构变化,卵巢抗氧化酶即超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性及脂质过氧化产物丙二醛的水平来评估钼对卵巢功能的影响。3.钼对小鼠血液和卵巢组织中微量元素的影响:收集钼浓度为0、20、40μg/mL组小鼠的血液和卵巢,并测量其钼、铜、铁、锌和锰的含量。4.维生素C、E对钼致雌性小鼠生殖毒性的治疗:实验分为五组分别为Water+Oil即阴性对照组,Mo+Oil即阳性对照组,Mo+VC+Oil组即VC组Mo+VE+Oil即VE组,Mo+VC+VE+Oil即VC+VE组。通过饮水钼暴露,浓度均为40μg/mL,14d后用维生素C或/和维生素E治疗7d。收集小鼠MⅡ期卵母细胞和卵巢,观察卵细胞形态结构,记录相关的卵巢参数并检测卵巢相应的生化指标情况。评估维生素C、E的治疗效果。结果1.钼对小鼠附植前胚胎体外发育的影响:当钼浓度≤10μg/mL时,钼不会显著影响胚胎质量。培养液中钼浓度≤20μg/mL时不会影响囊胚和出生率。钼浓度≥40μg/mL时显著降低了分裂率,囊胚率,出生率和细胞平均数,显著提高了囊胚退化的比例。钼为120μg/mL时抑制囊胚到出生期间的发育。钼为160μg/mL时导致胚胎全部发育停滞(最多发育至16-细胞)并且伴随有大量的退化。2.钼对小鼠卵巢功能的影响:与对照组相比,钼浓度为5μg/mL时,MⅡ期卵母细胞的形态结构,卵巢指数,排卵情况均有所提高;而40μg/mL时则产生不利的影响。当钼浓度≥20μg/mL时,卵巢内卵母细胞和颗粒细胞中的线粒体会有一定程度的损伤,同时在超微结构上表现有病理变化。钼浓度20μg/mL和40μg/mL组与对照组相比,卵母细胞的细胞质中含有相对较少的细胞器,以及体积较小、形态异常、肿胀且嵴变形的线粒体。卵巢内卵母细胞和颗粒细胞的线粒体受损,出现空泡化、轻度肿胀、嵴消失和膜的完整性缺失的现象。卵巢中的所有这些变化,都是伴随着超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性以及丙二醛(MDA)水平的变化而变化。3.钼对小鼠血液和卵巢组织中微量元素的影响:小鼠卵巢和血液中的钼含量均极显著地增加,与此同时,Zn、Fe、Mn的含量均有极显著的下降。当钼浓度≥40μg/mL时,能显著降低卵巢中Cu、Zn、Mn的含量。4.维生素C、E对钼致雌性小鼠生殖毒性的缓解作用:小鼠在40μg/mL的低钼暴露后,再分别用适量的VC,VE及VC和VE经口治疗,结果发现对小鼠卵巢的氧化损伤有一定的保护作用。结论1.钼对胚胎发育是否产生的不利影响是由剂量大小决定。较低剂量(≤20μg/mL)时,小鼠胚胎没有明显的损伤。高剂量时(≥40μg/mL),胚胎质量显著降低。2.钼通过调节卵巢的氧化应激而影响卵母细胞质量的情况主要取决于钼剂量的大小。特别是在浓度适合的时候,钼能够提高卵巢的功能。所以,钼或许能作为一个用于治疗女性不孕症的新型候选药物。3.钼可以在小鼠卵巢中沉积,且与Zn、Fe、Mn之间存在拮抗关系。当钼浓度≥40μg/mL时,卵巢中Cu、Zn、Mn的缺乏,导致Cu-Zn SOD和Mn SOD活性的减弱,进而产生了细胞损伤。4. VC、VE对钼造成的小鼠卵巢的氧化损伤有一定的缓解作用;二者联合使用对卵巢的保护作用更明显。