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低温是影响植物生长发育的重要影响因子,是造成农业减产危害、影响我国乃至全世界粮食安全的重要原因之一。因此,通过克隆抗冻基因、探讨植物抗冻基因的分子机理、利用转基因技术提高植物的低温耐受力具有重大的意义。本文的目的是研究拟南芥肌动蛋白解聚因子ADF5在低温胁迫下的功能。本实验克隆了该基因的全序列并连入载体1300-RFP,通过浸花法转化入拟南芥FABD2使其在拟南芥体内表达,用潮霉素进行筛选;因其带有RFP荧光定位,并用荧光显微镜进一步检测确定是否转入拟南芥FABD2。转基因植株以1300-RFP载体作为对照,在低温处理下,观察植物的表型效应,研究该基因在低温胁迫处理时的表达模式,分析该基因可能的耐受机制,从而揭示低温胁迫下拟南芥肌动蛋白解聚因子ADF5的功能。本实验首先分离并克隆了拟南芥肌动蛋白解聚因子ADF5、ADF5R、T10A、T10D。进而通过农杆菌介导的遗传转化体系将植物表达载体1300-ADF5-RFP、1300-ADF5R-RFP、1300-ADF5-T10A-RFP、1300-ADF5-T10D-RFP导入拟南芥植株FABD2,经过潮霉素筛选,1300-ADF5-RFP、1300-ADF5R-RFP、1300-ADF5-T10A-RFP、1300-ADF5-T10D-RFP均得到T1代,1300-ADF5-T10A-RFP得到T3代并经荧光检测检测证明已整合到拟南芥FABD2基因组中。实验证明,1300-ADF5-T10A-RFP对转基因拟南芥生长发育有影响,初步推测1300-ADF5-T10A-RFP影响植物形态的建成,如以下结果1300-ADF5-T10A-RFP T3代拟南芥形态观察结果:转基因T3代植株根毛稀少并且弯曲;而对照根毛密集和根毛直。统计结果显示,1300-ADF5-T10A-RFP T3代平均开花时间比拟南芥1300-RFP载体对照开花时间延迟了7-8天。1300-ADF5-T10A-RFP T3花粉管与野生型比较,1300-ADF5-T10A-RFP T3出现一长一短两根花粉管。