雪峰乌骨鸡禽白血病病毒分离及感染鸡肿瘤相关基因的表达检测

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禽白血病病毒是一类以引起禽肿瘤性增生及病变为特征的RNA病毒,是禽淋巴细胞性白血病、成髓细胞性白血病、成红细胞性白血病等疾病的主要成因,也是造成部分具有传染性的良恶性肿瘤的关键因素。本文以自然感染禽白血病病毒的雪峰乌骨鸡及人工感染禽白血病病毒雏鸡为模型,初步探讨雪峰乌骨鸡禽白血病病毒分离及其肿瘤相关基因的表达检测,以期为临床上地方品种鸡禽白血病的防制提供依据。从湖南某雪峰乌骨鸡种鸡场采集病料,通过临床诊断及病变观察、ELISA及RT-PCR方法进行检测。结果表明,病鸡眼观可见腹部肿大,肝脏颜色暗红体积变大,其表面和切面上有结节型或弥漫型灰白色病灶分布,组织学观察可见肝细胞出现不同程度变性坏死,血管周边有大量淋巴样瘤细胞浸润增生。对病鸡样品进行ELISA检测,阳性率为100%,RT-PCR检测其感染病毒为禽白血病病毒J亚群且无其他病毒感染。采用qRT-PCR方法检测自然感染病例中各组织脏器中肿瘤相关基因的表达量变化。结果表明,心脏、脾脏和肺脏中p53、H-ras、K-ras、N-ras、Bcl-2、EGF、EGFR、Hsp70、Hsp90 mRNA表达量均高于健康鸡,肝脏中表达量均低于健康鸡,肾脏中p53和EGF表达量低于健康鸡。采用qRT-PCR方法检测人工感染ALV-J来观察雏鸡在第28d、35d及42d时体内肿瘤相关基因的表达以及动态变化。结果表明,心脏、脾脏及肺脏在28d至42d时呈现由表达增高转为表达下降这一趋势,肝脏中K-ras在35d至42d时高于对照组表达量,N-ras在42d时表达上升,EGF和EGFR仅在35d时表达增高,其他基因在第28d至42d时表达量均低于对照组,肾脏中H-ras、K-ras、N-ras表达量均低于对照组。这表明雪峰乌骨鸡感染ALV后,体内肿瘤相关基因表达发生变化,可能参与ALV致雪峰乌骨鸡肿瘤发生及免疫抑制的形成。
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