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广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)是一种危害严重的人兽共患的食源性寄生虫,通常寄生在鼠的肺动脉和右心室。人是非正常宿主,因食含有未煮熟的广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的食品而感染。人感染后,肠道中的广州管圆线虫Ⅲ期幼虫进入血液,随血液运行到脑部,从而引起嗜酸粒细胞增多性脑膜脑炎。玛瑙螺(Achatinafulica)是广州管圆线虫重要的中间宿主;随着玛瑙螺的迁移,也加重了广州管圆线虫病的流行。
本论文第一部分研究了来自中国深圳、清远、江门和温州的广州管圆线虫8个成虫样品线粒体的cox1、nad1、nad6和rrnS基因序列的多态性。利用PCR扩增了cox1、nad1、nad6和rrnS基因片段,并对阳性扩增产物进行了克隆和序列测定。序列分析结果表明:来自我国4个不同地域的广州管圆线虫的线粒体的cox1、nad1、nad6和rrnS基因序列长分别为421bp、428bp、358bp和560bp,序列完全一致。
本论文第二部分研究了来自中国深圳、清远、江门和温州的广州管圆线虫10个成虫样品ITS基因的序列多态性。获得ITS序列长为1593-1614 bp,A+T含量58.03％-58.36%,其中ITS-1序列长为712-720 bp,5.8S序列长为153 bp,ITS-2序列长为633-650 bp,部分28S序列长为70 bp。将测序结果进行比对分析,广州管圆线虫ITS-1种内序列碱基差异0.3%-1.0%。与血管圆线虫和脊圆线虫进行种间比对,ITS-1种间序列碱基差异为15.0%-34.6%。10个来自中国的4个不同地区的样本,ITS-2种内序列碱基差异为0.0%-1.3%。广州管圆线虫与血管圆线虫的ITS-2种间碱基差异为22.7%-24.2%。结果分析表明,广州管圆线虫的ITS序列种间差异高于种内差异,本研究为广州管圆线虫的分类、鉴别诊断、分子流行病学调查以及防治等更深入的研究奠定了基础。
本研究第三部分根据广州管圆线虫的ITS-1序列设计引物,成功建立了检测玛瑙螺中广州管圆线虫的可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法。该方法可以检测螺组织样品中的广州管圆线虫三期幼虫,具有较高的特异性,敏感性为0.01ng/μL,比传统的PCR方法高10倍。该方法具有敏感性高、特异性强、快速简单、容易操作、产物易检测等特点。