本研究构建了分别表达 RVFV 囊膜蛋白 G(N+C)、GN 及 GC 的重组杆状病毒rBac-G(N+C)、rBac-GN 及 rBac-GC。SDS-PAGE、Western-blot 表明分子量分别为56KD、58KD 左右的 GN 和 GC 在 rBac-G(N+C)、rBac-GN 及 rBac-GC 感染 Sf9昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应性。Western-blot 结果同时显示 GN 及 GC单独重组,其表达水平分别高于 G(N+C)重组表达水平。以 rBac-G(N+C)、rBac-GN和 rBac-GC 感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被 ELISA 板,检测灭活 RVFV 免疫小鼠血清特异囊膜蛋白 GN、GC 特异抗体,显示出高度敏感性和特异性;rGN 及rGC 感染 Sf9 昆虫细胞裂解物包被 ELISA 的敏感性高于 rG(N+C)。 本研究进一步构建了表达 G(N+C)和 GN 的重组 WR 株牛痘病毒 rVV-G(N+C)和 rVV-GN。SDS-PAGE、Western-blot 证实,分子量分别为 56KD、58KD左右的 GN/GC 和 GN 分别在 rVV-G(N+C)和 rVV-GN 感染 Hela 细胞获得正确表达,GN 单独重组同样明显高于 G(N+C)重组表达水平。分别以 104 pfu 剂量的 rVV-G(N+C)和 rVV-GN 腹腔内接种 BALB/c 小鼠,免疫三周后以杆状病毒表达囊膜蛋白 GN 为包被抗原,间接 ELISA 分别检测到免疫鼠血清显著的 GN 特异抗体反应。 本研究构建了表达 RVFV 囊膜糖蛋白 G(N+C)的真核表达质粒 pCAGG-GN、pCAGG-GC 和 pCAGG-G(N+C)。三种质粒 DNA 等量混合按 100μg 剂量肌肉注射免疫 BALB/c 小鼠。两次加强免疫三周后以杆状病毒表达囊膜蛋白 GN、GC 为包被抗原,间接 ELISA 分别检测到免疫鼠血清产生显著的 RVFV 囊膜蛋白特异抗体;同时,以 RVFV 囊膜蛋白 G(N+C)嵌合(pseudotyping)基因组缺失囊膜 G 蛋白并为绿色荧光蛋白基因替代的水疱性口炎病毒(VSV?G*GFP),形成具有感染及绿色荧光蛋白表达指示能力的嵌合病毒颗粒 VSV?G*GFP-RVFV-G,用以替代RVFV 病毒进行中和抗体检测,DNA 免疫小鼠诱导中和抗体滴度在 1:32 以上。研究结果首次证实 DNA 免疫可诱导 RVFV 特异中和抗体的产生。