论文部分内容阅读
第一部分C-KIT/D816V突变在急性髓系性白血病中的发生率调查目的：分析C-KIT/D816V突变在中国人AML患者中的发生率。方法：收集2008年至2011年送至干细胞中心行C-KIT/D816V检测的AML外周血标本286例,提取者外周血单个核细胞,采用Real-time Quantitative PCR SYBR green染料法检测C-KIT D816V突变。结果：286例AML患者中,有8例(2.8%,其中6例男性,2例女性)患者发生了C-KIT/D816V突变,其在男性患者和女性患者中的发生率分别为3.9%和1.5%,在男性患者中的发生率高于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。8例C-KIT突变患者中有5例M2,1例M4,另外2例患者FAB亚型诊断未明。在AML各亚型中的发生率分别为：M26.8%,M44.3%。结论：C-KIT/D816V突变最常发生在M2中,其次为M4。在男性患者中的发生率高于女性。本研究从流行病学的角度为C-KIT/D816V突变在中国人AML及其亚型中的发生率提供了重要依据。第二部分关于携带C-KIT/D816V突变及C-KIT/WT的急性髓系白血病PP2A蛋白活性变化的研究目的：从流行病学的角度探讨携带C-KIT/D816V[位于C-KIT激酶区(C-KIT kinase domain, C-KIT/TKD)]突变的急性髓细胞性白血病患者及携带野生型C-KIT (C-KIT/WT)的急性髓细胞性白血病患者单个核细胞中蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphotase 2A, PP2A)的活性变化,并对携带C-KIT/N822K(位于C-KIT/TKD)突变的AML细胞株Kasumi-1及携带野生型C-KIT的AML细胞株HL60中PP2A活性进行了比较。方法：选取8例C-KIT/D816V突变的AML患者,12例C-KIT/WT AML患者及20例健康对照,提取单个核细胞,使用PP2A免疫沉淀磷酸酶检测试剂盒检测PP2A活性。体外培养HL60及Kasumi-1细胞株,使用PP2A免疫沉淀磷酸酶检测试剂盒检测PP2A活性。使用SPSS16.0对数据进行分析。结果：C-KIT/WT AML组患者单个核细胞PP2A的活性(565.69±122.56pmol)与正常人(706.02±154.22pmol)比较有所降低,而C-KIT/D816V AML组(419.01±96.97pmol)活性最低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。Kasumi-1细胞PP2A活性(886.420±152.187 pmol)与HL60细胞(1196.442±219.483pmol)比较有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：AML患者PP2A活性有所降低,且携带C-KIT/TKD的AML患者及细胞株中PP2A活性与携带C-KIT/WT的AML患者或细胞株比较有所降低,PP2A蛋白活性与AML的发生、发展密切相关,对AML的诊断及治疗可能有参考价值。第三部分FTY720对携带C-KIT激酶区突变的AML体外抑制作用的机制研究目的：本研究探讨FTY720对携带C-KIT/TKD突变的AML细胞系Kasumi-1及未携带C-KIT/TKD突变的AML细胞系HL-60细胞增殖、凋亡的影响，并对FTY720对两种细胞作用的进行了比较了,探讨其可能机制。方法：体外培养AML细胞株HL60及Kasumi-1,使用FTY720(2.5,5,10和20μM)处理HL-60、Kasumi-1细胞24小时,应用CCK8试剂盒检测细胞的增殖状况。使用FTY720(10μM)处理细胞36h,应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。使用FTY720(5μM,10μM)处理细胞5h,应用PP2A免疫沉淀磷酸酶活性检测试剂盒测定细胞PP2A活性。用FTY720(5μM)处理细胞5h,应用Western Blot检测PP2A的表达水平。结果：FTY720能有效抑制HL60和Kasumi-1细胞的增殖,随药物作用浓度的增加,抑制作用越强,作用24h后FTY720对HL60和Kasumi-1的IC50分别为13.5μM和20μM,P<0.05,两者差异有统计学意义。FTY720作用于HL60和Kasumi-1后,两种细胞的凋亡率均增加,且Kasumi-1的凋亡率增加更显著。FTY720能增强HL60和Kasumi-1细胞的PP2A活性,但不改变PP2A的表达水平。PP2A抑制剂OA能抑制FTY720所致的PP2A活性增强,同时也能减轻FTY720所致的细胞毒性作用。FTY720不改变PP2A的表达水平。结论：FTY720能通过活化PP2A抑制HL60和Kasumi-1细胞的增殖并诱导两种细胞发生凋亡,且对后者的作用强于前者。FTY720对AML,尤其是难治性AML可能有治疗价值。