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目的:获取、培养体外兔膝关节软骨细胞;建立软骨细胞损伤模型并分析兔关节软骨细胞损伤模型中细胞外基质因子II型胶原(Col-II),基质金属蛋白酶3(MMP13),基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)和透明质酸(HA)基因mRNA五个时间点的表达变化。方法:取健康4周龄新西兰大白兔,雌雄均可,麻醉之后,无菌环境解剖双膝关节,收集软骨细胞。体外培养获取的软骨细胞,并将生长状态良好的细胞传代,之后接种于六孔板培养,制备损伤模型。用显微镜观察损伤前和损伤后1、3、5、7 d共5个时间点的软骨细胞的形态变化并拍照。采用实时荧光定量PCR检测软骨细胞损伤前和损伤后1、3、5、7 d共5个时间点的II型胶原酶,基质金属蛋白酶3,基质金属蛋白酶抑制剂1和透明质酸基因mRNA表达变化。结果:兔关节软骨细胞损伤模型被成功制备。损伤后Ⅱ型胶原mRNA 1 d组表达比正常细胞水平少(P<0.05),损伤后3 d组与7d组较1 d组增多,在第7天时,恢复到正常水平。与正常组相比,损伤后1天组MMP13 mRNA表达下降,约为正常组的1/47,差异有统计学意义(P<0.05),损伤后3天组和5天组较1天组上升,5天组高于3天组5倍,差异有统计学意义(P<0.05),高于7天组31倍,差异有统计学意义。TIMP 1 mRNA损伤后1天组比正常组表达升高,损伤后3天组低于1天组和5天组,1天组高于3天组2倍,5天组高于3天组2倍,差异有统计学意义(P<0.05),损伤3天后基因升高,第7天达到正常水平。损伤后1天组和3天组HA mRNA表达量低于正常组,5天组高于所有其他损伤时间点,高于正常组3倍,高于1天组13倍,高于3天组6倍,高于7天组10倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MMP13、TIMP1、透明质酸和II型胶原基因在细胞损伤后的表达变化都具有一定的规律,本实验通过研究细胞外基质因子在软骨细胞损伤模型不同时间点的表达变化,为未来基因治疗软骨损伤选择合适的窗口期。