论文部分内容阅读
目的:通过观察鹿茸对大鼠下肢缺血模型外周血骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)数量及其增殖能力、一氧化氮(NO)含量以及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,探讨鹿茸动员大鼠骨髓EPCs修复内皮功能,促进缺血肢体血管新生的作用机制。方法:采用结扎法建立大鼠下肢缺血模型,将成模大鼠随机分为模型组,鹿茸高、中、低剂量组和复方丹参片组,空白组为同批次正常大鼠仅作皮肤切开缝合,每组15只。于术后第二天开始灌胃给药,鹿茸高、中、低剂量组分别按照0.572g·kg-1、0.286g·kg-1、0.143g·kg-1;复方丹参片组为0.286g·kg-1,每天灌胃给药1次,连续14天。正常组和模型组给予等剂量蒸馏水。分别在术后第3天、第7天、第14天,各组随机取大鼠5只,采用全自动生化仪检测大鼠外周血谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的表达水平;取左侧大腿腓肠肌用免疫组化的方法进行处理,观察缺血下肢毛细血管结构的恢复,计算毛细血管密度(单位视野蓝染面积/单位视野面积);左下肢腓肠肌用苏木精-伊红(HE)染色观察期病理改变。并且在第7天从外周血中分离、培养EPCs,然后收集贴壁细胞利用流式细胞仪来鉴定CD34/CD133表型,使用CCK-8法检测细胞数量变化及其增殖能力,采用ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平并用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量。结果:1.利用流式细胞仪来鉴定CD34/CD133均阳性表达,表明各组均出现了内皮祖细胞。2.鹿茸高剂量组能够增加下肢缺血大鼠外周血中EPCs的数量,并且显著提升其增殖能力;明显扩增其外周血中NO的含量;促进VEGF蛋白的表达。3.鹿茸高剂量组在术后第3天、第7天和第14天时均能够显著减低下肢缺血大鼠血清AST、CK、LDH的活力水平,与前人实验结果相符。4.术后第7天、第14天,鹿茸高剂量组显著提升下肢缺血大鼠MVD值,但在术后第3天,其作用效果并不明显。5.鹿茸能够改善下肢缺血大鼠肌细胞萎缩,间质增生的病理改变;增加了肌纤维间的血管。结论:鹿茸能够动员内皮祖细胞修复内皮功能,促进血管新生,减轻患肢缺血状态。为治疗下肢缺血疾病提供了部分依据,具有深远的影响意义。