三七为五加科植物Panax notoginseng (Burk.) F. H. Chen的干燥根和根茎,始载于《本草纲目》,有散瘀止血,消肿定痛之效,用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛。三七作为一种名贵的中药,其止血化瘀、消肿定痛功效显著,近来更是作为心脑血管疾病的良药被大量使用。本课题主要有下两方面：一、三七粉末饮片的质量控制研究《中国药典》三七饮片项下规定的三七粉末饮片的制法为：“取三七,洗净,干燥,碾细粉即为三七粉”。中药饮片是由k 药材加工炮制而成的,根据药材的性质加工成适宜的形式,有片、段、块、丝、颗粒等,粉末是中药饮片的一种应用形式,《神农本草经》记载：“药性有宜丸者,宜散者,宜水煮者,宜酒渍者,宜膏煎者,亦有一物兼宜者,亦有不可入汤酒者,并随药性,不得违越”。其中的“散”,对饮片而言即为粉末。有些质地坚硬的中药多加成细粉包煎,如珍珠母、磁石、石膏等；有些中药本身即为粉末状,如：蒲黄、青黛、松花粉等;还有一些有效成分不溶于水或不耐高温,不宜入汤剂的中药常加工成粉末入药。粉末饮片使用方便,具有可确保其药效成分能被人体充分吸收利用,在确保疗效的前提下,显著提高药材利用率,减少药材用量,节省药材资源等特点。中药饮片销售总额近年来快速增长,市场潜力巨大,但缺乏粉末饮片的相关质量标准,亟待对其进行规范。粉末饮片以其方便、高效等优势被广泛地使用,但药材粉碎后物理性质发生改变,比表面积增大,有效成分更易溶出的同时吸湿性、稳定性、被微生物污染的情况等也发生了变化,与标准汤剂的等效比例关系不确定。随着粉末饮片市场的快速发展,其面临着制备工艺多样、基础研究薄弱,缺乏完善的适宜于粉末饮片特点的质量控制标准,粉末饮片的质量标准有待规范化等问题,成为制约饮片产业健康有序发展的关键,促使相关基础研究的完善以引导和规范市场发展。因此,本课题拟以三七作为研究对象,以之作为模式中药对粉末饮片的质量标准进行研究,确定其作为粉末饮片使用的最佳粒度、质量控制等问题,为粉末饮片质量标准体系的建立奠定基础,丰富粉末饮片的科学内涵为合理使用粉末饮片提供科学依据,对粉末饮片市场的规范化和更好的发展有积极的意义。二、三七总皂苷的提取纯化工艺研究根据国家食品药品监督管理局关于中药提取物备案管理的要求,对三七总皂苷的提取纯化工艺进行研究,确定三七提取、纯化、脱色的具体工艺。本课题主要研究内容有：1、市场调查本课题调查了市场上三七粉末饮片的名称、粒度、包装、制法等,并在实验室自制了不同粒径的三七粉末饮片,调查发现市场上已有的三七粉末饮片名称不一,有超细粉、最细粉、中粉等不同粒度。生产厂家不同,包装材料也各异,有玻璃瓶、聚乙烯塑料、铝塑薄膜等。中药饮片企业生产的粉末饮片多采用超微粉碎的方法,药店中粉碎多用小型药材粉碎机,一般为中粉。2、质量控制研究粒径是粉末饮片质量的一个关键评价指标,有必要对其粒径进行规范化。确定出最佳粒径。根据《中国药典》一部三七项下内容,对收集的72批三七药材或三七粉测定其水分含量、浸出物及三种皂苷(三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1)总含量。确定三七粉末饮片水分、浸出物、三种皂苷的含量限度,分别为不超过13%、不少于17%、不少于5%。测定了三七粉末饮片的微生物含量,为三七粉微生物限度标准提供参考。2.1 粒径规范按照《中国药典》粒径标准将三七分别打粉,分为中粉、细粉、最细粉、极细粉,另有从药店购买的超细三七粉(超微粉),共五种规格,分别测定不同粒径三七粉的吸湿性、溶出度、稳定性,并对其进行综合评价,确定出三七粉的最佳粒径。实验结果发现,三七粉为细粉、最细粉、极细粉和超细粉时其溶出度较高,稳定性和吸湿性无显著差异,确定三七粉最佳粒径为细粉即可。2.2 近红外光谱技术对三七粉末饮片的快速检测“丸、散、膏、丹,神仙难辨”,中药粉碎后其原有性状特征全部缺失,如何快速准确地鉴定粉末饮片的质量极为重要。本课根据《中国药典》三七项下内容测定72批三七粉末饮片水分、浸出物及三种皂苷总含量,根据测定结果制定相应的含量限度标准。并采用近红外光谱技术,分别建立了三七粉末饮片水分、浸出物、三七皂苷定量分析模型。首先采集样品的近红外光谱,用偏最小二乘法(PLS)建立近红外光谱与含量之间的定量分析模型,结果表明三七中水分、浸出物、三种皂苷总含量的近红外分析建模集验证均方差(RMSEC)分别为：0.3535、0.2824、0.9536,内部交叉验证决定系数(r)分别为：0.9940、0.9725、0.9792,预测平均回收率分别为：101.12%、100.28%、102.15%,统计学检验表明NIR预测值与药典高效液相(HPLC)方法之间差异无统计学意义,说明用近红外光谱技术对三七粉进行定量分析是可行的,为快速准确地分析三七粉的质量提供依据。2.3三七粉微生物限度检查三七很多作为散剂直接口服使用,《中国药典》2015版四部非无菌药品微生物限度标准中对“研粉口服用贵细饮片、直接口服及泡服饮片”的规定是：不得检出沙门菌、耐胆盐革兰阴性菌应小于104cfu/g。本课题以收集到的10个三七粉末饮片样品作为研究对象,以酵母菌、霉菌、沙门菌及耐胆盐革兰阴性菌为检查指标,检查三七粉末饮片中微生物含量限度,为三七粉安全有效地使用提供参考。3、三七总皂苷提取纯化工艺研究三七总皂苷是三七的重要活性成分,是很多中成药的药效成分。为保证含中药提取物的中成药的安全有效和质量可控,按国家食品药品监督管理局颁发的中药提取物的生产备案要求,对三七总皂苷提取纯化的生产工艺参数进行研究,使其达到备案管理的要求。本课题以三七总皂苷的含量为指标,确定三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins, PNS)的提取纯化工艺为：取三七粗粉100g,用10倍量的70%的乙醇于85℃回流提取3次,每次提取1小时,过滤,合并滤液并减压浓缩至约200m1,过滤,用水定容至250m1。提取液以1BV/h的流速过HPD100苯乙烯型非极性大孔吸附树脂柱,用4BV去离子水洗涤,水洗液弃去,以4BV 80%的乙醇洗脱,3BV洗脱液过D941阴离子交换树脂脱色精制,并用2BV 70%乙醇洗脱树脂,合并上样液和洗脱液,减压浓缩至浸膏干燥,即得。此工艺提取的三七总皂苷纯度达85%,符合《中国药典》三七总皂苷项下的含量测定的要求。本研究与已知的纯化工艺相比,确定了三七总皂苷的脱色工艺,用D941树脂进行脱色使三七总皂苷颜色符合标准,含量明显提高。