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第一部分 原代成人肝细胞的大量分离 目的：研究大规模分离获取成人肝细胞的方法，观测普通培养过程中肝细胞形态变化和代谢合成功能。方法：用体外灌流装置，胶原酶两步灌流法消化分离成人肝细胞，收集的肝细胞培养在含10％小牛血清及多种添加物的William’s E培养基中，对不同培养时间的肝细胞进行形态学观察，测定肝细胞生化合成及细胞损伤情况。结果：收集的肝细胞纯度大于95％，细胞活率在94％～98％之间，产量达到2.5×10~7～5.8×10~7／g肝组织。接种培养后2周内生长旺盛，同时代谢合成功能最好。结论：本研究的分离法可获取大量高活性的原代成人肝细胞，可作为生物人工肝较为理想的细胞来源。 第二部分 肝细胞的搅拌微载体式培养 目的：探讨肝细胞的搅拌微载体式培养方法。方法：用搅拌微载体式培养方法培养肝细胞株HL7702及以采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离获取的SD(Sprague-Dawley)大鼠肝细胞，显微镜下动态观察细胞生长情况及形态变化。结果：HL7702细胞密度于培养的第10天达最高峰，间断搅拌培养优于持续搅拌培养。搅拌微载体式培养的Wistar大鼠肝细胞存活率、密度优于贴壁培养。结论：搅拌微载体式培养的肝细胞密度及肝细胞量优于普通单层培养。本法为肝细咆冻存，肝细胞移植，以及生物人工肝等领域的研究和广泛应用提供了基础。 第三部分 冻存对肝细胞色素氧化酶P4503A4活性的影响 目的：比较新鲜的和冷冻后的肝细胞的P4503A4活性。方法：两步法分离3例UW液保存成人肝脏，用高效液相色谱仪检测新鲜的和冷冻30天后复苏的肝细胞P4503A4酶活性。结果：冷冻30天后复苏的肝细胞活率及P4503A4活性较新鲜肝细胞低。结论：普通冻存复苏技术保存肝细胞活性不理想。P4503A4活性是反映肝细胞功能较好的指标。