【摘 要】
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目的:外源性MSCs向靶组织的低归巢率是影响MSCs治疗效果的一个关键障碍。本论文旨在研究调控MB-e MSCs迁移归巢的机制,为进一步探索促进MB-e MSCs向受损卵巢迁移、归巢的有效途径,从而增强MB-e MSCs对POF的治疗效果提供理论基础。方法:通过Western blotting检测MB-e MSCs表面CXCR4受体表达,采用RNA干扰(RNAi)技术构建sh RNA干扰载体敲降M
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目的:外源性MSCs向靶组织的低归巢率是影响MSCs治疗效果的一个关键障碍。本论文旨在研究调控MB-e MSCs迁移归巢的机制,为进一步探索促进MB-e MSCs向受损卵巢迁移、归巢的有效途径,从而增强MB-e MSCs对POF的治疗效果提供理论基础。方法:通过Western blotting检测MB-e MSCs表面CXCR4受体表达,采用RNA干扰(RNAi)技术构建sh RNA干扰载体敲降MB-e MSCs表面CXCR4表达,通过Western blotting检测CXCR4敲降效率。通过Transwell细胞迁移实验分别检验SDF-1浓度、CXCR4受体表达对MB-e MSCs体外迁移的影响。连续7天向C57BL/6小鼠腹腔注射0、5、10、15mg/kg表柔比星,观察并记录小鼠一般情况,通过阴道脱落细胞学检查观察动情周期,HE染色观察卵巢组织及卵泡种类及数量,ELISA检测小鼠血清AMH、FSH水平等指标的变化,鉴定POF模型建立是否成功。通过Western blotting检测表柔比星处理对小鼠卵巢局部SDF-1浓度的影响。将MB-e MSCs经尾静脉移植至表柔比星化疗损伤性POF小鼠体内,通过Western blotting检测POF小鼠卵巢CXCR4蛋白表达变化,分别研究卵巢局部SDF-1浓度、CXCR4受体表达对MB-e MSCs向受损卵巢归巢的影响。结果:MB-e MSCs表面表达CXCR4受体;通过RNAi技术sh1/sh2-MB-e MSCs中CXCR4蛋白相对表达均明显降低,分别为MB-e MSCs的0.69±0.64倍(P=0.001)和0.46±0.02倍(P=0.000),MB-e MSCs表面CXCR4表达经sh RNA干扰后被显著抑制。Transwell迁移实验提示,在0-200ng/m L梯度浓度的SDF-1的趋化下,MB-e MSCs迁移数目随SDF-1浓度升高而增加(P<0.05),并且在100ng/m L时达到最大值。阻断CXCR4受体后,MB-e MSCs迁移数量明显减少(P=0.000)。接受表柔比星连续注射后,10mg/kg表柔比星处理组小鼠毛发光泽度降低、进食量减少、体重下降、活动减少、对外界刺激反应迟钝;动情周期消失,停滞于动情间期或动情前期;AMH水平下降,FSH水平升高;子宫、卵巢组织萎缩,窦卵泡及生长卵泡种类及数目减少,闭锁卵泡数量增加,认为POF模型成功建立。化疗组小鼠卵巢SDF-1蛋白表达随表柔比星浓度增加而升高。向POF小鼠予以MB-e MSCs尾静脉注射,移植2周后POF小鼠卵巢CXCR4蛋白相对表达明显升高(P<0.0001)。当MB-e MSCs上CXCR4受体被阻断后,POF小鼠卵巢CXCR4蛋白表达显著降低(P<0.001),差异均有统计学意义。结论:表柔比星注射可诱导C57BL/6小鼠POF,引起卵巢局部SDF-1浓度升高。经尾静脉向表柔比星化疗损伤性POF小鼠移植MB-e MSCs后,卵巢CXCR4蛋白表达增加。SDF-1可结合MB-e MSCs表面CXCR4受体通过SDF-1/CXCR4轴促进MB-e MSCs在表柔比星化疗损伤性POF小鼠体内迁移归巢。
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