仙茅属植物种质资源遗传多样性分析

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:david70s
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仙茅属植物包括仙茅组和大叶仙茅组植物,属多年生草本植物,具有较高的药用价值。目前,仙茅属植物尤其是仙茅天然种群数量急剧减少,有些种群仅剩几十株,面临着种群灭绝的危险。因此,开展仙茅属植物遗传多样性研究及保护性开发工作迫在眉睫。本文以仙茅属植物的13个野生种群的134份样本为研究对象,进行遗传多样性分析,主要研究结果如下:
  (1)采用试剂盒法和改良CTAB法进行仙茅叶片基因组DNA提取,均能获得高质量的DNA。冷冻保存叶片和硅胶保存叶片获得的DNA相差不大,但硅胶保存法提取过程中容易褐化,提取的DNA有部分降解,在野外采样条件不太具备的情况下可以采取硅胶保存。采用试剂盒法、冷冻保存的叶片进行DNA的微量提取,是一种比较有效的方法,获得的DNA可以满足后续分子实验要求。仙茅根茎DNA的大量提取,可以采用2%的CTAB提取液,操作步骤中PVP的加入量为0.2g,抽提过程高盐NaCl满足4mol/L时提取的仙茅根茎DNA质量和纯度最好。
  (2)在仙茅属植物ISSR-PCR扩增体系的建立与优化中,进行了DNA模板、dNTPs、Mg2+、引物和TaqDNA聚合酶等五个主要影响因子的单因素试验与正交试验,建立了适合仙茅属植物ISSR-PCR扩增的反应体系(25μL):1×PCRBuffer,模板DNA50ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U。
  (3)运用已建立的最佳反应体系对仙茅属植物的13个天然种群134份个体进行遗传多样性分析,筛选出15条引物共扩增出256条清晰、重复性好的条带,多态性条带百分比达到91.79%;在种群水平上,各种群多态性位点百分率和Shannon信息指数分别为4.69%-29.30%,0.0283-0.1605。其中,四川宜宾种群遗传多样性最高(P=29.30%,I=0.0283),云南9号种群遗传多样性最低(P=4.69%,I=0.1605)。
  (4)运用遗传一致度与遗传距离数据对13个种群进行UPGMA聚类分析,13个种群共聚为两大类,广西雅长、云南大叶、四川盐边三个种群聚为一类,其他的种群聚为一类。四川宜宾与江西武功山种群最先聚在一起,二者的亲缘关系最近;广西雅长与四川盐边的种群也聚在一起,说明二者亲缘关系较云南的较近。
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