论文部分内容阅读
背景和目的：食管癌是一种严重威胁人类生命健康的消化道恶性肿瘤，以鳞状上皮癌多见，中国是世界上食管癌的高发国家，也是世界上食管癌高死亡率的国家之一，在我国占消化道肿瘤死亡的第二位，仅次于胃癌，而中国北方地区特别是河南省林州市是中国乃至世界上食管癌发病率最高的地区之一。食管癌的发生是一个多因素，多步骤的发生过程，预后之差在于其癌细胞有较强的增殖能力及侵袭性，即使一些表面生长缓慢的食管癌也常常伴有深层浸润。随着分子生物学的发展，利用分子生物学的指标判断预后、指导综合治疗以及发展分子生物治疗已成为提高恶性肿瘤治疗效果的发展方向。EGFR（epidermal growth factor receptor，EGFR）属于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶生长因子受体，与配体结合后，可启动其信号属于Ⅰ型跨膜酪氨酸激酶生长因子受体，与配体结合后，可启动其信号转导下游一系列的级联反应，最终引起核内早期反应基因转录水平的增加，使细胞增殖、转化。现有的研究表明EGFR在肿瘤细胞的增殖、分化、抗凋亡、肿瘤血管形成及转移等方面起重要作用。β-连环蛋白（β-catenin，β-cat）是多功能蛋白质，既参与E-cad／cat复合体的形成，在细胞粘附中发挥作用，又作为Wnt信号传导通路的中心环节参与细胞增殖分化的调控。研究表明EGFR激活后可调控E-cad／cat复合体中的β-catenin磷酸化导致其从复合体分离，从而促进肿瘤的转移。本实验探讨EGFR和β-catenin在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理参数的关系，为评估预后、指导治疗提供依据。材料与方法：1．60例系焦作市第二人民医院外科1992年1月至2000年8月手术切除食管癌标本（同一病例包括癌组织、5cm以外的癌旁正常组织），HE切片病理证实为鳞癌。其中男性33例，女性27例；年龄35～73岁，平均年龄50岁。高、中、低分化分别为34、12和14例，其中31例有淋巴结转移，29例无淋巴结转移。按TNM分期标准，Ⅰ期17例，Ⅱ期12例，Ⅲ期15例，及Ⅳ期16例；按浸润深度分，T1 13例，T2 12例，T3 21例，T4 14例。全部病例术后进行6～18月的随访，随访结束时死亡29例，尚生存31例。2．应用S-P免疫组化法，EGFR、β-catenin浓缩型鼠抗人单克隆抗体、免疫组化试剂盒及DAB试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，取厚4μm石蜡切片，常规脱蜡、水化后，采用电炉加热煮沸修复抗原，EGFR、β-catenin单克隆抗体均按1∶100稀释，以PBS代替一抗作阴性对照，用已证实EGFR、β-catenin染色阳性的食管鳞癌切片作阳性对照。3．应用SPSS10.0统计软件包进行χ2检验，Spearman相关分析，生存分析应用Kaplan-Meier，Log-rank test时序检验法，检验水准为α=0.05。结果：1．EGFR、β-catenin阳性定位分布及表达：（1）EGFR阳性颗粒主要位于肿瘤细胞的胞浆内，周围基质中未见阳性染色。癌旁正常组织和癌组织中EGFR阳性表达率分别为18.3％（11／60）和71.7％（43／60），两组间相比差异有统计学意义（χ2=34.478，P＜0.01）。（2）β-catenin在癌旁正常组织中表达均位于细胞膜，胞浆未见明显的阳性信号，而食管鳞癌组织中呈异常表达，胞膜表达减少，出现胞浆或胞核表达，癌旁正常组织和癌组织中β-catenin阳性表达率分别为91.7％（55／60）和65％（39／60），两组间相比差异有统计学意义（χ2=12.570，P＜0.01）。2．EGFR、β-catenin的表达与食管癌临床病理特征及预后的联系：（1）在食管鳞癌中随去分化程度的增高、浸润深度的增加及淋巴结转移，EGFR阳性表达升高，高分化与中、低分化组的阳性率分别为57.7％（15／26），82.4％（28／34），浸润在未及外膜（T1、T2）与侵及外膜或以外区域（T3、T4）的阳性率分别为48.0％（12／25），77.1％（27／35），无淋巴结转移组与有淋巴结转移组阳性率分别为58.6％（17／29），83.9％（26／31），差异均有显著性（P＜0.05）。按TNM分期，Ⅲ、Ⅳ期EGFR阳性表达者28例（90.3％），显著高于Ⅰ、Ⅱ期（51.7％，15／29）（P＜0.05）。比较18月生存率，EGFR表达阳性组生存率为41.9％（18／43）与EGFR表达阴性组76.5％（13／17）相比，差异亦有显著性（P＜0.05）。（2）60例食管鳞癌中，高分化组β-catenin的阳性表达率（88.5％，23／26）明显高于中、低分化组（47.8％，16／34）（P＜0.05），无淋巴结转移组阳性表达率82.8％（24／29）亦高于有淋巴结转移组48.4％（15／31），有显著性差异（P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ期β-catenin阳性表达率为79.3％（23／29），Ⅲ、Ⅳ期51.6％（16／31），两组相比差异有显著性（P＜0.05），且β-catenin的阳性表达组18月生存率59.0％（23／39）高于β-catenin的阴性表达组38.1％（8／21），差异亦具有显著性（P＜0.05）。在浸润深度方面T1、T2与T3、T4阳性表达率分别56％（14／25），71.4％（25／35），差异无显著性（P＞0.05）。3．EGFR和β-catenin在食管癌中表达的相关性分析：EGFR与β-catenin共同阳性表达者为23例，共同阴性表达者1例，EGFR表达阳性但β-catenin阴性者20例，EGFR表达阴性但β-catenin阳性者16例，EGFR与β-catenin表达呈负相关关系（r=-0.384，P=0.002）。结论：1．EGFR在食管鳞癌中呈现过表达，与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、18个月生存率、浸润深度相关，EGFR过表达可能在食管鳞癌的发展、浸润、转移中起重要作用，EGFR过表达者预后差。2．β-catenin在食管鳞癌中胞膜表达减少，出现胞浆、胞核异常表达，与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、18个月生存率相关，和浸润深度无关，提示β-catenin异常表达可能参与了食管鳞癌的发展、转移，β-catenin异常表达与预后差相关。3．在食管鳞癌中，EGFR与β-catenin表达呈负相关关系，提示二者之间可能存在某种调控关系，协同参与了食管鳞癌的发展和演进。4．EGFR和β-catenin在食管癌的发展、转移中密切相关，提示联合监测二者的表达可为食管癌进展程度和预后判断提供帮助，亦为食管癌的基因治疗提供一个新的思路。