【摘 要】
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通过蛋白质组学,特别是肽质量指纹图谱的方法,我们鉴定出铜绿微囊藻PCC7806的蛋白。在研究中我们采用2-DE和PMF联用的策略。铜绿微囊藻PCC7806培养于正常的BG-11培养基,通过
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通过蛋白质组学,特别是肽质量指纹图谱的方法,我们鉴定出铜绿微囊藻PCC7806的蛋白。在研究中我们采用2-DE和PMF联用的策略。铜绿微囊藻PCC7806培养于正常的BG-11培养基,通过超声破碎结合三氯乙酸/丙酮沉淀的方法提取藻全蛋白。双向电泳第一向等电聚焦采用18cm IPG胶条(pH 4-7),SDS-PAGE为第二向。银染过的蛋白挖点,然后用胰酶消化。提取胰酶消化后的多肽片段与基质溶液混和,点样,装入MALDI-TOF质谱仪(BRUKER,ReflexTMⅢ)作进一步分析。每个蛋白点获得的峰图经过了分析,以查明和消除污染峰和自切峰。接下来的步骤称为标峰,我们获得了168个蛋白点的质谱峰,将这些质谱峰提交至NCBI/MASCOT数据库以查找相匹配的蛋白质。通过蛋白图上的实验参数(pI和分子量)与在线数据库搜索到的理论参数进行对比,我们实现了这些蛋白的搜索、鉴定。我们已经取得了以下成果:鉴定了187个蛋白质,并根据这些蛋白的来源物种和它们与我们研究的物种(铜绿微囊藻PCC7806)的关系将它们分成3组。168个蛋白点的质谱结果中,由于有18个点的匹配蛋白各包含2个,所以共得到187个蛋白。在这187个蛋白质鉴定结果中,有14个(7.5%)蛋白来源于铜绿微囊藻PCC7806;有98个(52.4%)的蛋白质来自属于蓝藻铜绿微囊藻PCC7806所属的蓝藻的进化树的不同分支;有75个(40.1%)的蛋白质,其分类与我们研究的铜绿微囊藻并不密切相关,但考虑其他的选择标准,如pI和分子量而被选择。与后两组数据相比,第一组中匹配蛋白的数量仍然较低,这说明还需要对铜绿微囊藻进行其他方面的研究.
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