目的：　　制备一种新型生物多功能复合材料—加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜，并进行形态学观察，初步研究其体外释药性能及抑菌作用，为该复合材料的研制及进一步临床试用奠定基础。　　本实验分为三部分：　　实验一：加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜的制备　　实验二：加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜的体外缓释研究　　实验三：加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜的体外抑菌实验方法　　实验一：采用离子交联法制备加替沙星-壳聚糖纳米粒混悬液，离心后冻干成粉末，并测定纳米粒的粒径、载药量和包封率。称取一定量加替沙星-壳聚糖纳米粒冻干粉以适量去离子水稀释，并根据其包封率，调整其中加替沙星的浓度为15mg/ml；分别向0.4ml纤维蛋白原溶液(A液)及0.4ml凝血酶溶液(B液)中加入0.1ml上述加替沙星-壳聚糖纳米粒冻干粉溶液，充分混匀后将A，B两液同时均匀地喷涂于羊膜的基底面，即得加替沙星终浓度为3mg/ml的加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜。光镜及扫描电镜进行形态学观察。　　实验二：将制备好的加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜放入装有5ml无菌生理盐水的无菌试管中，置于35℃恒温培养摇床中摇荡，每24小时置换1次生理盐水，连续15天收集浸出液，置-20℃冰箱中冷冻保存待测。共进行5次平行实验。按照实验一的方法，用加替沙星原料药溶液制成加替沙星胶联羊膜药膜作为对照组。　　实验三：采用微量肉汤稀释法检测加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜的体外抑菌活性。将增菌后的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌液用生理盐水调整浓度至0.5麦氏比浊管标准(相当于1.0×108CFU/ml)，再用MH肉汤稀释为1.0×105CFU/ml浓度用于接种。倍比稀释加替沙星原料药和加替沙星-壳聚糖纳米粒溶液为32～0.03μg/ml11个浓度。在96孔无菌培养板第1-2排1-11孔分别加入100μl倍比稀释后不同浓度的加替沙星原料药溶液，第3-5排1-11孔分别加入100μl倍比稀释后不同浓度的加替沙星-壳聚糖纳米粒溶液，第6-8排1-11孔分别加入100μl对倍稀释后的第5-15天的加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜浸出液，每排最后1孔(第12孔)作为不加药的生长对照孔；最后将制备好的接种物加到微孔板中，每孔100μl。35℃孵育16～24h观察结果。　　结果　　实验一：加替沙星-壳聚糖纳米粒粒径为291±33nm，载药量为10.46％，包封率为61.32％。加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜在肉眼下为白色半透明薄膜，有一定柔韧性和可塑性，羊膜与载纳米药物的纤维蛋白胶粘合紧密。苏木精-伊红染色光镜下观察，可见羊膜结构完整，无明显皱缩，羊膜上皮面可见单层柱状上皮细胞，羊膜基底面与纤维蛋白胶粘合紧密，纤维蛋白胶厚度、着色较为均一，并可见胶原纤维的网状结构。扫描电镜下观察，清楚可见胶原纤维排列成的三维交叉网状结构，加替沙星-壳聚糖纳米粒成簇地附着在网状结构上，纳米粒呈圆形，粒径大小为250nm左右。　　实验二：在体外条件下加替沙星胶联羊膜药膜的释放非常缓慢，可持续释药7d，早期释放相对较快，24h累计释放率为(68.34±1.61)％，以后释药逐渐缓慢，72h累计释放率为(92.52±2.33)％，此后释药趋于平衡；相比之下，加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜的释药速度更加缓慢，24h只释放了(25.27±3.07)％，72h的累计释放率也仅为(55.66±2.98)，且可持续释药达15d。　　实验三：加替沙星原料药组、加替沙星-壳聚糖纳米粒组及加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜浸出液组对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度值分别为0.063μg/ml、0.03μg/ml和0.05μg/ml；对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度值分别为1μg/ml、0.25μg/ml和0.42μg/ml。　　结论　　1、载加替沙星-壳聚糖纳米粒的纤维蛋白胶与羊膜能稳定胶联制成加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜，该材料制备工艺可控，具有较稳定的生物物理学性能。　　2、加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜在体外具有良好的缓释作用，且能够达到有效的药物浓度。　　3、加替沙星-壳聚糖纳米粒胶联羊膜药膜在体外有较强的抑菌作用，且有效抑菌时间较长。