伏马毒素B1对猪肠上皮细胞增殖与凋亡的影响

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanguangkai
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我国是养猪大国,养猪业在国内养殖业中占着举足轻重的地位,在养殖过程中,外界刺激往往会引起猪胃肠道不适,降低生产效益。霉菌毒素是污染十分广泛的一类真菌代谢产物,主要分布在粮食作物与粮食制品中,饲料的运输、储存不当常常会引起霉菌毒素的污染。当污染的饲料被动物采食后,会引起机体发生一系列毒性反应。伏马毒素(Fumonisins,FB)是由串珠镰刀菌、轮状镰刀菌等产生的一类真菌毒素,常见于发霉的小麦与玉米中,其中,FB1是毒性最大、污染最为广泛的一种。FB1通过霉变的饲料进入机体体内,能够作用于呼吸系统、泌尿系统、消化系统、免疫系统等,产生毒性作用。胃肠道是最先接触到食物源性外界刺激的器官,已有研究证实FB1会引起猪肠道细胞紧密连接被破坏,但关于FB1是否能引起猪肠道细胞凋亡还暂不清楚。因此,本研究采用体外培养的猪小肠上皮细胞为研究对象,探究FB1对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)细胞增殖与凋亡的影响,从而为研究FB1对肠道的致病机制提供理论基础。本研究采用MTT法测定FB1对IPEC-J2细胞活力的影响,HE染色后在光学显微镜下观察FB1致IPEC-J2细胞形态变化,Ed U法检测FB1对IPEC-J2细胞增殖的影响,Real-time PCR检测周期相关基因PCNA、P21、P27、CDK2、CDK4、cyclin D1、cyclin E1m RNA表达变化。采用JC-1染色检测FB1对IPEC-2细胞线粒体膜电位的变化,流式细胞术检测细胞凋亡数量,并通过Real-time PCR与Western-blot检测凋亡相关因子Caspase3、Caspase9、Bax、Bcl-2的相对表达量。结果显示,IPEC-J2细胞在FB1作用48 h后,20μg/mL FB1处理组细胞活力出现显著下降,在40μg/mL FB1组中尤为显著。细胞形态学观察结果显示,0-40μg/mL FB1作用24 h时,细胞形态与数量未见显著变化,而在作用48 h时,与对照组细胞相比,染毒组细胞皱缩,数量变少,漂浮细胞显著增加。Ed U增殖试验结果显示,荧光强度随FB1浓度的增加而显著降低,表明FB1能够抑制IPEC-J2细胞的增殖,且Real-time PCR检测结果表明FB1能够提高IPEC-J2细胞中P21、P27 m RNA的相对表达量,显著抑制PCNA、CDK2、CDK4、cyclin D1、cyclin E1 m RNA的相对表达。FB1作用于IPEC-J2细胞48 h后,JC-1染色结果显示,红色荧光强度随FB1浓度升高而降低,绿色荧光强度则呈升高趋势,表明FB1染毒后导致IPEC-J2细胞线粒体膜电位下降,同时,流式检测结果表明FB1作用48 h能够增加凋亡细胞的数量,且Caspase3、Caspase9、Bax的相对表达量上升,Bcl-2 m RNA的表达下降。综上所述,FB1导致IPEC-J2细胞周期受阻,周期相关因子的表达受到影响,抑制细胞的增殖。同时,FB1显著降低细胞线粒体膜电位,上调促凋亡基因和下调抗凋亡因子的表达,诱导细胞发生凋亡,从而促使IPEC-J2的损伤发生。
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