胰腺实性假乳头肿瘤(solid-pseudopapillary neoplasm,SPN)是一种好发于年轻女性、具侵袭性生长方式的低度恶性肿瘤,目前暂被WHO归入胰腺外分泌肿瘤。SPN的临床病理特征与其生物学行为的相关性仍存在争议,同时SPN的诊断因其形态学多样性常很困难,容易和包括胰腺神经内分泌肿痛在内的其它肿瘤相混淆,现有的免疫标记在其鉴别诊断中尚存缺陷;另外SPN的组织学来源和病理发生机制仍不清楚。本课题旨在分析SPN临床病理特征与其生物学行为的相关性,寻找新的有确诊意义的诊断与鉴别诊断标记,同时阐明SPN的组织学来源,并探讨其与性激素相关的发生机制及与其侵袭性行为的关系,为其诊断和治疗提供新的形态、免疫和分子基础。　　第一部分胰腺实性假乳头肿瘤临床病理特征及生物学行为探讨　　背景和目的:胰腺实性假乳头肿瘤(SPN)是一种具有侵袭性生长方式的低度恶性肿瘤,虽然有较好的预后,仍有少数转移复发病例,甚至死亡。本研究旨在建立SPN的临床病理学特征与其侵袭性生物学行为之间的相关性,寻找能预测其预后的相关因素。　　方法:总结74例病例的临床病理资料及镜下病理特征,分析这些特征与SPN侵袭性生物学行为的相关性。　　结果:SPN的侵袭性与性别、年龄、肿瘤发生部位、症状无相关性,与浸润胰腺、神经侵犯、血管侵犯、渐进性坏死巢及肿瘤细胞多形性、核分级也无关,仅与肿瘤大小及核分裂数相关。　　结论:肿瘤大小及核分裂是判断SPN侵袭性生物学行为的可靠指标。　　第二部分胰腺实性假乳头肿瘤诊断及鉴别诊断标记的筛选　　背景和目的:胰腺实性假乳头肿瘤(SPN)形态学及免疫表型的多样性,导致SPN与胰腺原发其它类型的肿瘤鉴别有时显得相当困难,特别是对穿刺活检的标本。本研究旨在分析不同免疫学标记对SPN的诊断及鉴别诊断价值,筛选有确诊意义的免疫标记。　　方法:分别制作55例SPN、51例胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrinetumor,P-NET)和54例胰腺腺癌(pancreatic adenocarcinoma,PAC)的组织芯片(tissue microarray,TMA),另收集19例SPN、6例胰腺腺泡细胞癌(acinar cellcarcinoma,ACC)、1例胰母细胞瘤(pancreatoblastoma,PB)的手术标本,用免疫组织化学方法检测CD99、E-eadherin、β-catenin、P120以及其它普遍用于辅助SPN诊断的免疫学标记在以上各类肿瘤中的表达情况。　　结果:CD99在所有的SPN肿瘤细胞中均显示出独特的核旁点状着色,40例P-NET(78.4％)示CD99细胞膜或膜浆阳性着色,4例PAC(7.4％)及1例(100％)PB表现出CD99弱膜阳性,所有ACC病例都不表达CD99。所有SPN细胞均不表达E-cadherin,β-catenin呈核浆强阳性染色,46例(90.2％)P-NET、52例(96.3％)PAC、6例(100％)ACC、1例(100％)PB示肿瘤细胞E-cadherin膜表达;所有51例P-NET、54例PAC、6例ACC、1例PB均示肿瘤细胞β-catenin膜表达。59例(79.7％)SPN为P120胞质着色,6例(8.1％)示包膜着色;38例(74.5％)P-NET为P120胞质表达,8例(15.7％)示胞膜表达;PAC、ACC、PB中分别有48例(88.9％)、5例(83.3％)、1例(100％)肿痛细胞胞膜表达P120,未见胞质表达。其它标记中,71例(95.9％)SPN、19例(37.2％)P-NET、4例(7.4％)PAC表达PR;59例(79.7％)SPN、46例(90.2％)P-NET、5例(9.26％)PAC表达CD10;66例(89.2％)SPN、45例(88.2％)P-NET、2例(3.7％)PAC表达CD56;72例(97.3％)SPN、48例(94.1％)P-NET、3例(5.6％)PAC表达NSE;ACC及PB对以上各项标记物均呈阴性。　　结论:CD99的核旁点状着色是诊断SPN最可靠的免疫学标记,β-catenin和E-cadhefin在SPN的诊断及鉴别诊断中也有重要意义。　　第三部分胰腺实性假乳头肿瘤起源探讨　　背景和目的:胰腺实性假乳头肿瘤(SPN)的起源至今仍不清楚,由于其免疫表型的多样性,对其来源的揣测也存在多种不同观点。本部分旨在发现能阐述其起源的新线索。　　方法:对74例SPN石蜡标本进行上皮和神经内分泌标记的免疫组织化学检测;对14例SPN新鲜标本行透射电镜观察;用免疫电镜法观察上皮和神经内分泌标记抗体在5例SPN细胞内的定位;同时以正常胰腺组织各种细胞成分为对照,寻找与其起源相关的超微结构和免疫电镜特征。　　结果:74例SPN病例对除CK7、CK19以外的上皮及神经内分泌标记均有不同程度表达。超微结构示SPN含丰富细胞器,主要为大量线粒体,其次为溶酶体,14例SPN中8例可见环状片层结构,11例见明显的细胞连接,1例见可疑神经内分泌颗粒,1例含类似酶原颗粒。免疫电镜示5例SPN中分别有4例肿瘤细胞胞质内散在胶体金标记的AE1/AE3和NSE,2例肿瘤细胞胞质内散在胶体金标记的SYN附着。　　结论:SPN中保存了上皮细胞的某些超微结构特征,是否存在酶原颗粒及神经内分泌颗粒尚未明确;SPN可能起源于胰腺泡心细胞。　　第四部分胰腺实性假乳头肿瘤中雌激素受体亚型的表达及功能探讨　　背景和目的：由于大多数胰腺实性假乳头肿瘤(SPN)患者为年轻育龄女性,性激素在SPN肿瘤发生发展中可能起到重要作用,但大量研究均显示SPIN高表达PR却缺乏ER表达。近年来有学者发现了雌激素受体亚型Erp蛋白在SPN中的表达,然而关于Erα和Erβ这两种亚型mRNA的定量研究尚是空白。本部分旨在通过对Erα,Erβ在SPN中的表达的定性定量研究,探讨其与肿瘤发生发展的相关性。PR在肿瘤中的表达亦被纳入研究。　　方法:对74例SPN及肿瘤旁正常胰腺组织石蜡标本进行Erα、ERβ1、PR的免疫组织化学检测;用qRT-PCR方法检测Erα、ERβ1、ERβ2、PR在14例手工显微切割后的SPN新鲜标本及肿瘤旁正常胰腺外分泌部的表达情况。　　结果:74例SPN中5例(6.8％)SPN细胞核弱表达Erα,胰腺外分泌部均不表达Erα ERβ1在69例(93.2％)SPN及63例(85.1％)肿瘤旁正常胰腺外分泌系统细胞核有表达,65例(75.7％)病例巾肿瘤染色强度高于正常胰腺组织,但表达相对强度在SPN侵袭性组与非侵袭性组中无显著差异(P＞0.05);71例(95.9％)SPN细胞核表达PR;正常胰腺外分泌部均不表达PR。ERβ1、ERβ2 mRNA含量在SPN中比正常胰腺外分泌部高,但表达差异不具有统计学意义(P＞0.05),ERβ1/Erα、ERβ2/Erα比值在肿瘤组织中高于正常胰腺外分泌部,差异具有统计学意义(P＜0.05);PR mRNA在肿瘤组织中的表达高于正常胰腺外分泌部,差异有统计学意义,(P＜0.01)。　　结论:在正常胰腺外分泌部及SPN肿瘤细胞中,ERB为优势亚型,Erβ/Erα比值的上升在SPN发生发展中可能起到重要作用。