帕金森病(PD)是危害中老年人健康的重要中枢神经系统退行性疾病,以中脑黑质致密部多巴胺(DA)神经元进行性退变为主要病理特征。小胶质细胞激活诱导的脑内炎症是PD的一种主要病理变化,5-脂氧酶(5-LOX)是催化花生四烯酸生成炎症介质半胱氨酰白三烯(CysLTs;包括LTC4,LTD4,LTE4)的关键酶,CysLTs通过激动CysLT受体参与多种脑内炎症病变,但是5-LOX与PD的关系尚未阐明,作为PD治疗靶点尚待研究。本研究目标：①在神经元样PC12细胞,以PD诱导因子鱼藤酮诱导PC12细胞损伤,观察5-LOX是否参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。②在小鼠小胶质细胞株BV2细胞,研究鱼藤酮刺激下BV2细胞5-LOX/CysLT1受体表达和/或活性变化,这种变化与BV2细胞激活和炎症因子合成释放的关系,观察5-LOx/CysLT1受体是否参与PD小胶质细胞激活。③评价5-LOX抑制剂CysLT1受体拮抗剂对PD神经元损伤和小胶质细胞炎症的作用。第一部分5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤目的：以鱼藤酮诱导PC12细胞损伤建立PD细胞模型,观察5-LOX是否参与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤。方法：在鱼藤酮处理后不同时间,以MTT方法检测PC12细胞活性变化,以免疫细胞化学方法检测5-LOX核膜移位情况；并观察5-LOX抑制剂zileuton的作用。结果：鱼藤酮(0.3-30μmol/L)诱导PC12细胞损伤；Zileuton (3-100μmol/L)减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤；鱼藤酮还时间和浓度依赖性引起5-LOX核膜移位,Zileuton (1-30μmo/L)能抑制5-LOX核膜移位。结论：5-LOX参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤,5-LOX抑制剂zileuton可抑制5-LOX激活,减轻细胞损伤。第二部分5-LOX/CysLT1受体在鱼藤酮诱导的BV2细胞激活中的作用目的：以鱼藤酮诱导BV2细胞激活建立PD细胞模型,观察5-LOX/CysLT1受体在鱼藤酮诱导的BV2细胞激活中的作用。方法：在小鼠小胶质细胞株BV2细胞,不同浓度鱼藤酮处理24h,观察BV2细胞形态和数量变化；以免疫荧光技术和流式细胞仪方法检测细胞吞噬功能改变；以Western blotting和免疫细胞化学方法检测5-LOX/CysLT1受体表达和分布情况；以ELISA方法测定5-LOX产物CysLTs和细胞因子IL-1β、TNF-α水平；并观察5-LOX选择性抑制剂zileuton和CysLT1受体拮抗剂montelukast的作用。结果：①鱼藤酮(0.001-0.03μmol/L)诱导BV2细胞增殖和吞噬功能增强,细胞因子IL-1β、TNF-α释放增加；Zileuton (0.01-1μmol/L)有效抑制鱼藤酮诱导的BV2细胞增殖和吞噬,减少IL-1β、TNF-α释放。②鱼藤酮浓度依赖性引起BV2细胞5-LOX表达增加,5-LOX发生核膜／胞浆移位,5-LOX产物CysLTs水平增加；Zileuton (0.001-1μmol/L)抑制鱼藤酮诱导的BV2细胞5-LOX表达和活性增加。③CysLT1受体拮抗剂montelukast (0.001-1μmol/L)可显著抑制鱼藤酮诱导的BV2细胞吞噬,并降低细胞因子IL-1p水平。鱼藤酮(0.001和0.003μmol/L)诱导CysLT,受体表达增加；鱼藤酮(0.003μmol/L)还时间依赖性引起CysLT,受体从细胞浆移位到细胞核。结论：5-LOX/CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的BV2细胞激活,5-LOX/CysLT1受体信号通路可能是调节小胶质细胞介导PD炎症的治疗靶点。