【摘 要】
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活性蛋白质是构成生命的基础物质,它的特异性检测一直是化学生物学的重要研究内容。荧光探针具有灵敏度高,选择性好,所需样品量小,可实现无损伤检测等优点而得到广泛应用。四
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活性蛋白质是构成生命的基础物质,它的特异性检测一直是化学生物学的重要研究内容。荧光探针具有灵敏度高,选择性好,所需样品量小,可实现无损伤检测等优点而得到广泛应用。四苯乙稀(TPE)作为新型荧光团具有“聚集诱导发光”效应(aggregation-induced emission,AIE),能够很好的解决传统的荧光分子因聚集引发粹灭的(aggregation-caused quenching,ACQ)难题,从而有效地提高检测的灵敏度。本论文利用TPE设计和合成了一系列的荧光探针,通过对蛋白质的检测得到了三类荧光探针。本论文包含以下三方面的内容:1、采用聚乙二醇单甲醚(mPEG,1000)增加TPE的水溶性来降低荧光,合成5个连接链为带有不同电荷氨基酸的探针并利用探针与蛋白质结合使TPE旋转受限来增加荧光值。研究结果表明该类探针是蛋白质等电点敏感型探针,可与蛋白质之间通过酸碱结合聚集从而导致荧光增强。2、以4-甲基吡啶盐为单胺氧化酶(MAO)的结合基团,采用不同连接链连接TPE设计合成了三个水溶性荧光探针。结果表明这三个探针均能够成功检测单胺氧化酶活性,并且连有苯基的反式结构探针(probe 7b)对单胺氧化酶A具有良好的选择性,细胞成像图显示探针能用于检测活细胞中单胺氧化酶活性。3、利用荧光共振能量转移(FRET)的原理,以TPEs和5(6)-羧基荧光素作为FRET体系的供受体,设计合成出了以磷酸基团作为识别基团的“OFF-ON”FRET探针。结果表明TPE与荧光素是一对具有良好FRET性能的荧光基团,并且该探针对碱性磷酸酶具有高度的专一性。探针也可直接用于报导细胞中碱性磷酸酶活性。综上所述,本文合成的9个探针中,probe1-5能检测分析具有不同等电点的蛋白质;probe6,probe7a;probe7b均可用于MAO检测;probe8能专一性检测碱性磷酸酶。
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