下丘脑弓状核-海马ghrelin通路对胃牵张传入信息和胃运动调控研究

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目的:探讨海马ghrelin对胃牵张敏感神经元放电活动和胃运动的影响。  方法:采用PCR、免疫印迹和免疫荧光组织化学染色等方法,观察ghrelin1A受体(GHSR-1a)在海马的表达。采用逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色,观察弓状核(Arc)内ghrelin神经元向海马CA1区的投射。采用单细胞外放电记录,结合电刺激Arc,观察Ghrelin、[d-lys-3]-GHRP-6等对海马CA1区神经元放电活动的影响,以及Arc—海马ghrelin通路对胃传入信息调控。采用在体胃运动记录方法,观察海马CA1区微量注射ghrelin对大鼠胃运动的影响,结合电刺激Arc和海马CA1区注射[d-lys-3]-GHRP-6,观察Arc—海马ghrelin通路对胃运动调控及潜在机制。  结果:海马微量注射ghrelin,在95个胃牵张兴奋(GD-E)性神经元中有58个神经元(61.05%)放电频率增加,呈现兴奋效应,22个神经元放电频率降低,呈现抑制效应,有15个神经元没有应答;在51个胃牵张抑制(GD-I)神经元中,有50.98%神经元(26/51)放电频率增加,14个神经元放电频率降低,11个神经元没有应答。若海马CA1区预先注射Ghrelin受体拮抗剂[d-Lys-3]-GHRP-6,可完全阻断ghrelin该刺激效应(P<0.05)。提示:ghrelin参与胃传入信息调控,该效应可能通过ghrelin1A受体而实现的。电刺激Arc可激活海马CA1区大部分胃牵张敏感神经元。在海马CA1区记录到的58个GD-E神经元中,电刺激Arc后,有38个神经元(38/58,65.52%)呈现放电频率增加,12个GD-E神经元放电频率降低,8个神经元对电刺激Arc没有应答;在26个GD-I神经元中,有18个神经元兴奋性增加(69.23%),3个神经元放电频率降低,5个神经元对电刺激Arc没有应答。海马CA1区预注射ghrelin受体拮抗剂[D-Lys-3]-GHRP-6,再电刺激Arc,与海马CA1区注射NS对照组比较,电刺激Arc诱导的海马CA1区胃牵张敏感神经元放电活动显著减弱(P<0.05)。在体胃运动研究结果显示,海马微量注射ghrelin,大鼠胃运动显著增强,表现为收缩幅度显著增加,收缩频率显著加快,并且呈现剂量依赖关系(P<0.05~0.01),而该种效应可被海马CA1区预先注射[d-Lys-3]-GHRP-6阻断。PCR、免疫印迹和免疫荧光组织化学染色研究显示,海马内有GHSR-1a mRNA和免疫阳性细胞的表达。荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色发现,海马CA1区有ghrelin/FG双标记的神经元,提示:海马CA1区ghrelin神经元可发出纤维投射至Arc。  结论:海马CA1区-Arc存在ghrelin神经和功能通路;该通路参与胃机械牵张传入信息和胃运动调控,该调控效应可能通过ghrelin受体信号通路而实现的。
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