目的： 谷氨酸(glutamate，GIu)是CNS重要兴奋性递质，正常情况下，谷氨酸参与多种生理功能，如：协调运动、认知、学习记忆等。但其过量释放对神经元具有兴奋毒性，引起许多急症脑疾病如脑卒中，癫瘸等和慢性神经退行性疾病。研究表明星形胶质细胞能重新摄取谷氨酸，防止过量的谷氨酸堆积引起神经元过度兴奋。病理情况下星形胶质细胞反而释放谷氨酸于细胞间隙，造成兴奋毒性损害。淀粉样前体蛋白(Amyloid Precursor Protein，APP)是一种跨膜蛋白，可被α-Secretase、β-Secretase及Y-Secretase(PS1等复合体)水解，释放出多种活性代谢产物，研究表明兴奋毒性损害及CNS神经元修复障碍过程可能与APP代谢异常有关。本组实验发现谷氨酸兴奋毒性损害下星形胶质细胞表达释放APP、PSl。银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract，GBE)是一种含有黄酮类和萜内酯等多种活性成分的混合物。鉴于GBE抗氧化、清除自由基、抑制缺血神经细胞凋亡，直接抗谷氨酸兴奋毒性作用，GBE已广泛应用于心脑血管疾病的临床治疗。本实验使用GBE50对谷氨酸兴奋毒性损伤进行干预。本课题观察海马星形胶质细胞谷氨酸兴奋毒性损害过程中APP、PS1的表达变化以及GBE干预对APP、PS1表达变化的影响。 方法： 我们采用Juurlink和Hertz报道的方法，培养SD乳鼠海马星形胶质细胞。第10—14d待细胞生长到80％以上融合后进行传代培养(传2—3代)，待细胞长满(需要10-14d)后种于24孔板，用于实验研究。分别用终浓度为50μM和100μM浓度的谷氨酸以及10μM浓度的甘氨酸进行兴奋毒性损伤。通过台盘兰染色来判断细胞的损伤程度，利用免疫荧光双重标记的方法观察APP、PS1的表达水平、分布变化及GBE干预对细胞的保护作用。 结果： 1、100μM谷氨酸对星形胶质细胞造成损伤，台盘兰染色示细胞突起淡化甚至消失，细胞数量减少，存活率比较：损伤组、GBE预处理组、GBE急性给药组、GBE单独给药组分别为45.64±2.8％、60.8±2.7％、51.1±20.8％、96.8±1.1％。 2、APP、PS1表达部位基本一致，细胞核，胞体及突起上均有表达。经过100μM谷氨酸和10μM甘氨酸处理15min，24h后观察细胞，PS1散在分布于胞浆内、胞核周围，而APP多分布于突起上；APP、PS1均表达上调，表达水平为正常对照组的233．33％、161．90％。 3、GBE预处理能够抑制谷氨酸所诱导的APP、PS1的表达变化。 结论： 1、24h后观察，星形胶质细胞对100μM浓度谷氨酸损伤有反应。 2、APP、PS1基础条件下有表达，谷氨酸损伤早期(24h内)快速表达并不断增强，APP表达快而强，PS1缓于APP。 3、GBE预处理给药有抗谷氨酸兴奋毒性作用，GBE急性给药抗兴奋毒性作用不显著。